【摘 要】
：
研究背景与目的碳青霉烯类抗生素具有抗菌谱广和抗菌活性强两大特点,对超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和/或头孢菌素酶（AmpC酶）高度稳定,是预防和治疗重症感染的最主要用药。基于抗生素的选择压力,耐碳青霉烯G-杆菌广泛流行,这无疑限制了临床用药。在积极寻找对策的同时,多重耐药菌、新的耐药基因不断涌现,给临床治疗带来巨大挑战。为进一步研究耐碳青霉烯G-杆菌的耐药机制,为碳青霉烯酶基因突变、耐药性的水平
【基金项目】
：
广东省科技计划项目（2014A01010711）； 广东省科技计划项目（2015A020211011）； 广州市科技计划项目（201510010167）；
论文部分内容阅读
研究背景与目的碳青霉烯类抗生素具有抗菌谱广和抗菌活性强两大特点,对超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和/或头孢菌素酶（AmpC酶）高度稳定,是预防和治疗重症感染的最主要用药。基于抗生素的选择压力,耐碳青霉烯G-杆菌广泛流行,这无疑限制了临床用药。在积极寻找对策的同时,多重耐药菌、新的耐药基因不断涌现,给临床治疗带来巨大挑战。为进一步研究耐碳青霉烯G-杆菌的耐药机制,为碳青霉烯酶基因突变、耐药性的水平转移与传播提供更充分的实验依据,为抗生素的合理使用提供实验室指导,对耐药菌株进行基因组学研究显得尤为重要。研究方法1.株菌来源与收集分离自我院检验科微生室2014～2015年接收粪便标本中的2株耐碳青霉烯G-杆菌。在含有4 μg/mL美罗培南（MEM）的麦康凯抗性平板上转种培养。通过纸片法于-80℃保存菌种。2.菌种鉴定与药物敏感性检测通过BD Phoenix 100全自动细菌鉴定仪进行种属鉴定和药物敏感性检测。3.全基因组的提取使用QIAGEN公司的细菌全基因组提取试剂盒获得细菌全基因组DNA。使用微量核酸蛋白浓度测定仪与琼脂糖凝胶电泳评估核酸浓度、纯度及降解程度。4.常见碳青霉烯酶基因的检测采用特异性引物,通过PCR检测常见碳青霉烯酶基因（NDM、KPC、SPM、VIM、IMP、OXA-48）及多粘菌素耐药基因（mcr）,PCR产物测序确认基因亚型。5.高通量测序对细菌全基因组DNA进行高通量测序并组装。6.质粒接合转移试验耐叠氮化钠大肠埃希菌J53（E.J53）为受体菌,进行肉汤接合转移试验。于含有4μg/mL美罗培南（多粘菌素）和150μg/mL叠氮化钠的共筛查平板上筛查接合子,对阳性接合子进行E-test药敏试验以及相关耐药基因验证。7.基因组学分析通过软件预测编码基因,使用各大数据库进行基因注释、蛋白注释及功能注释,重点分析耐药基因。使用NCBI数据库的在线分析工具对核酸序列进行比较基因组学分析以及耐药基因周围环境分析。对新发现的金属β-内酰胺酶基因blaAFM-1进行碱基差异分析、进化分析及蛋白结构预测。8.新型金属酶基因功能验证化学合成目的基因连接到载体质粒上,通过克隆表达及改良Hodge试验进行功能验证。研究结果1.目标菌株分离自我院微生物室2015年粪便标本中1株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌NFYY0065,首次在该菌种中检测到碳青霉烯酶基因blaNDM-5与多粘菌素耐药基因mcr-1共存;分离自我院微生物室2014年粪便标本中1株耐碳青霉烯粪产碱杆菌AN70,检测到新类型金属β-内酰胺酶编码基因,将其命名为blaAFM。2.高通量测序在肺炎克雷伯菌中分离得到1条染色体、1条blaNDM-5阳性质粒、1条mcr-1 阳性质粒;在粪产碱杆菌中分离得到1条染色体、1条blaAFM阳性质粒。所有序列均已提交至GenBank数据库。3.质粒接合转移试验对疑似阳性接合子进行药敏试验以及耐药基因检测,表明耐药基因blaNDM-5、mcr-1与AFM及其质粒具有水平转移的能力。4.基因组学分析这2株G-杆菌均携带多种耐药基因。肺炎克雷伯菌中,blaNDM-5 基因形成基因簇“tnpA-IS3000-IS30-IS5-blaNDM-5-bleMBL-trpF-TAT-IS6-ISKox3”,位于IncX3型质粒;mcr-1基因由可移动元件ISAPl1介导,位于IncHI2型质粒。粪产碱杆菌中,新类型金属β-内酰胺酶基因blaAFM位于广寄主质粒IncW上,蛋白空间结构预测提示AFM酶活性中心双金属位点。5.新型金属酶基因功能验证阳性克隆菌株改良Hodge实验阳性,提示blaAFM转录翻译碳青霉烯酶。研究结论本课题对两株耐碳青霉烯G-杆菌进行基因组学研究,首次发现blaNDM-5与mcr-1共存于肺炎克雷伯菌,两质粒为不同的不相容群质粒,可稳定共存且具备水平转移与传播的能力;另外,本课题发现新类型金属β-内酰胺酶,将其编码基因命名为blaAFM,已提交至NCBI数据库,获得GenBank检索号MK143105。为探讨耐药基因进化、流行提供了新的实验室依据,凸显了规范应用抗菌药、监测耐药菌、防控院内感染的重要性。
其他文献
幼儿体育是促进幼儿身心健康发育的重要手段。然而,幼儿教师在实际工作中由于缺乏幼儿体育教育能力,幼儿体育工作发展说多做少,形同虚设。针对这一问题,我国出台了学前教育三年行动计划等政策,旨在加强幼儿教师队伍建设与培养。本文采用文献资料法、问卷调查法、访谈法、观察法等研究方法,通过对文献的查阅和与专家的讨论,制定了《幼儿教师体育教育能力培训需求调查问卷》以及《幼儿教师体育教育核心素质调查问卷》,通过对一
本文运用文献资料法、访谈法、问卷调查法、数据统计法,抽样调查海淀区10个派出所,分析海淀区派出所民警日常工作特点,产生碎片化时间的特征,碎片化时间的现实状况、体育锻炼现状及需求,努力探索适合派出所民警利用碎片化时间进行体育锻炼的方式方法,帮助派出所民警合理利用碎片化时间进行体育锻炼,将民警体育锻炼方式多元化、碎片化,切实提高民警身体健康状况。研究结论:（1）海淀区派出所90%的民警患有疾病,每周能
研究背景:帕金森病是一种常见的神经系统退行性疾病,在我国具有高患病率的特点。运动功能障碍是帕金森病的典型临床表现,但研究发现,帕金森病患者通常在运动症状之前出现非运动症状,例如胃肠功能障碍。目前的研究观察到帕金森病患者存在肠道微生物群组成的改变,因此提出了肠道微生物组的改变可能作为PD发病机理中最早的事件。同样,我们前期的临床研究也证实了 PD患者伴随着肠道微生物组紊乱。而且,我们已在前期工作中证
第一章鉴定Wnt-3a处理后神经干细胞的GSK-3 β,Gli2,β-catenin,MASH的表达目的:本章节主要探讨在神经干细胞中,Wnt-3a能否影响GSK-3β,β-catenin,Gli2,MASH的表达,进而影响神经干细胞的增殖和分化;并进一步探索其分子机制,为临床治疗SCI寻找新策略并提供理论和实验依据。方法:通过显微镜观察大鼠胎儿神经干细胞的生长状态,并获取第二代神经干细胞;本实验
人教PEP版《义务教育教科书·英语》编排的单元内容之间具有密切的联系，反映了单元整体的教学目标，其话题内容具有明显的整体性。因此，教师须从单元整体教学出发，合理设计读写教学方案，满足课程改革倡导的单元整体教学理念和读写结合教学原则的要求。文章对单元整体教学理念下的读写教学策略展开了深入研究，希望运用科学的教学策略达成单元教学的语用教学目标。
一、研究背景前列腺癌常转移到骨,导致严重并发症甚至死亡。因此,前列腺癌骨转移相关影响因素及机制研究具有极其重要的临床意义。慢性应激是一种长时间持续性的应激过程,其诱导的慢性、持续性交感神经系统激活,可参与调节不同的病理生理效应。越来越多的研究表明,肿瘤的进展与交感神经系统密切相关。应激诱导的交感神经信号可以通过肿瘤-神经的相互作用影响肿瘤的生长及转移,从而影响患者的临床预后。成骨细胞介导骨相关疾病
第一部分:更新的系统评价与Meta分析:成人超声引导下短轴法和长轴法在中心静脉穿刺的应用比较目的实时超声引导直视下中心静脉穿刺置管的方法主要有短轴法（平面外法）和长轴法（平面内法）,这两种方法的临床优缺点尚缺乏系统性比较。本研究对既往多个超声引导下中心静脉置管的临床试验进行系统评价与meta分析,为超声应用于中心静脉穿刺置管平面内法与平面外方法的选择提供理论依据。方法两位独立评价人员检索了美国国立
1.研究目的1.1验证血小板计数联合肝硬度排除肝硬化患者高风险食管胃静脉曲张（high risk gastro-oesophageal varices,HRGOV）的效能。1.2比较脾厚、肝硬度、血小板计数等指标评估肝硬化患者HRGOV的诊断和排除效能,通过logistic回归分析建立常规指标诊断模型,并比较其与上述指标诊断HRGOV效能,进一步评估序贯联合Baveno Ⅵ拓展标准及脾厚诊断HRG
研究背景和目的头颈部肿瘤是人类最常见的肿瘤类型之一,位居恶性肿瘤发病的第六位。近年来头颈部肿瘤的研究进展迅速,特别在肿瘤标志物以及新的治疗策略方面取得了可喜的突破,然而,仍有部分患者并未取得良好效果,或短期后出现复发。因此,头颈部肿瘤的初次治疗得到了越来越多的关注。头颈部肿瘤除鼻咽癌外,大多数肿瘤未出现远处转移者首选手术治疗,其中颈部转移淋巴结的处理方式至关重要。头颈部肿瘤患者的颈部淋巴结转移是仅
研究背景甲状腺疾病是孕期常见的内分泌疾病之一。2017年美国甲状腺协会的指南中建议,在没有建立特定妊娠期参考范围的情况下,促甲状腺激素（TSH）的参考上限值由原来的2.5mIU/L提高至4.0mIU/L,且联合甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）提出不同的建议及处理。临床甲状腺功能减退症与母儿的不良影响及治疗的必要性已得到广泛研究证实,但对亚临床甲状腺功能减退及TSH水平在2.5-4.0mIU/L与