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本研究的目的：探讨ARHI基因作用于ras通路的具体部位，和对EGF自分泌的影响以及对ras相关的细胞内信号蛋白(EGFR、ERK1/2、pan-Ras)的作用初探。研究分两个部分：
第一部分ARHI在胰腺癌中的抑癌作用以及对EGF-EGFR-Ras-Raf-MAPK/ERK的影响。
材料和方法：采用质粒扩增和鉴定的方法获取并验证了载有野生型ARHI基因的质粒pIRES2-EGFP-ARHI；选取ARHI基因缺失，ras突变细胞株Panc-1为研究对象，分别将重组质粒plRES2-EGFP-ARHI瞬时转染和未转染细胞(阴性对照)进行了以下研究：
1、通过绘制生长曲线分析EGF刺激下ARHI基因对胰腺癌细胞增殖的影响；
2、ELISA检测ARHI基因转染对胰腺癌细胞株EGF自分泌环的影响：细胞培养上清中EGF含量和细胞膜及胞质中EGFR的表达情况；
3、Westemblot方法检测ARHI蛋白的表达对Panc-1细胞内EGF-EGFR-Ras-Raf-MAPK/ERK1/2通路蛋白pan-Ras，P-ERK的影响，其中蛋白变化以与参照蛋白灰度比值为单位。
结果：
1.细胞增殖速率：转染pIRES2-EGFP-ARHI后的Panc-1细胞增殖受到抑制，与对照组相比有显著性差异(p<0.05)；
2.EGF-ELISA和EGFR-ELISA。
1)ARHI转染组和未转染组在单一DMEM培养液中EGF分泌均低于EGF-ELISA试剂盒敏感的下限，且二者间不存在显著性差异(p>0.05)。
2)ARHI转染组和未转染组细胞膜和细胞质中EGFR含量不存在显著性差异(p>0.05)。但是两组细胞中EGFR的表达均受EGF浓度、作用时间的影响，其中高浓度组(100ng/mL)和空白组(0ng/mL)、低浓度组(10ng/mL)存在显著性差异(p<0.05)：EGF低浓度下可以诱导EGFR表达增加，高浓度下反而抑制其表达。不同时间(24、48、72、96小时)组间EGFR表达存在显著性差异(p<0.05)。
3.Westem blot检测pan-Ras和P-ERK/T-ERK。
1)ARHI转染组和未转染组细胞内EGF-EGFR-Ras-Raf-MAPK/ERK通路蛋白pan-Ras表达存在显著性差异(p<0.05)。转染组24小时以后转染组中Ras蛋白明显下降，与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。并且不同浓度下转染组pan-Ras均随时间而表达量减少。非转染组在低浓度EGF刺激pan.Ras短时间(48小时)内呈上升的趋势，之后呈下降；而高浓度EGF刺激下，pan-Ras的表达开始比较平稳，长时间(72小时)后才呈现上升的趋势。
2)ARHI转染组和未转染组细胞内EGFR-Ras-Raf-MAPK/ERK通路蛋白P-ERK表达存在显著性差异(p<0.05)。24小时内转染组P-ERK表达有短暂的升高，与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。EGF=200ng/mL时，各个时间点转染组和对照组ERK活性均存在明显差异(p<0.05)，说明在EGF高浓度下，ARHI对EGF-EGFR-Ras-Raf-MAPK/ERK通路影响最为显著。转染组和为转染组的P-ERK表达均受到EGF浓度、作用时间及其交互作用的影响。因而得出：ARHI和EGF共同作用于EGF-EGFR-Ras-Raf-MAPK/ERK通路，P-ERK表达受两者的共同影响。
第二部分.ARHI稳定转染Panc-1单克隆细胞株建立的探索。采用G418筛选方法设立筛选浓度，20天挑取单克隆细胞团，在扩大培养的过程中，细胞逐渐死亡。
结论：
1.ARHI基因可以抑制肿瘤细胞的增殖，但不改变肿瘤细胞的形态。
2.ARHI基因不影响肿瘤细胞外分泌EGF(低于试剂盒敏感下限)。
3.ARHI基因不改变肿瘤细胞~EGFR的表达，外源性EGF却能对EGFR的表达起作用。
4.ARHI基因能够抑制pan-Ras蛋白的表达，外源性EGF也对pan-Ras蛋白的表达起作用。
5.ARHI基因和外源性EGF能通过EGF-EGFR-Ras-Raf-MAPK/ERK通路共同影响ERK蛋白的活性。