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背景:脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是急性脑血管疾病中致残率和死亡率较高的疾病,也是成人永久性残疾的常见原因之一。目前关于脑出血导致脑损伤的具体机制尚不完全明确,炎症反应、氧化应激、细胞凋亡和自噬是目前已被证实的脑出血后脑损伤分子机制。研究脑损伤的分子机制,对寻找积极有效的治疗靶点具有重要意义。最近的研究发现NDP-MSH(Nle4-D-Phe7-α-MSH)能结合黑皮质素受体-1(Mc1r)通过多种信号通路在蛛网膜下腔出血、实验性脑外伤等疾病中发挥抗炎、抗凋亡和抗氧化应激等神经保护作用。但NDP-MSH在脑出血后脑损伤的神经保护作用,尤其是抗凋亡和抗氧化应激反应的影响和相关分子机制尚不清楚。目的:研究Mc1r激动剂NDP-MSH对小鼠ICH后神经功能、脑水肿程度、氧化应激反应、神经元凋亡的影响,并探究其相关分子机制。方法:选取25g成年c57BL/6小鼠,采用自体血注射法建立ICH模型,并分别在ICH后6 h、12 h、24 h、72 h、7 d时间点断头取脑收集血肿周围脑组织,应用蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测Mc1r表达的动态变化情况;此外,在ICH后24 h断头取脑,制作冰冻切片,应用双标免疫荧光染色法(double immunfluorescence staining)检测Mc1r在神经元的表达情况。为探究Mc1r激动剂NDP-MSH对小鼠ICH脑损伤的神经保护作用并确定NDP-MSH的最佳剂量,在建模后1 h经腹腔注射三种不同剂量(1.5μg/只,5μg/只,15μg/只)的NDP-MSH,在ICH后24 h采用改良Garcia评分和Beam balance评估小鼠的神经功能,用干湿法测双侧大脑脑含水量;用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测MDA,CAT,SOD的水平。为探究Mc1r神经保护作用的分子机制,在模型建立前48 h经侧脑室注射Mc1r si RNA或者PI3K特异性抑制剂LY294002;并在ICH模型建立后1 h,经腹腔注射NDP-MSH。在ICH后24 h用ELISA检测MDA,CAT,SOD的水平;用Western blot检测Mc1r、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-Nrf2、Nrf2、Bcl-2、c-caspase 3、caspase 3的表达情况;用末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP-biotin nick end labeling,TUNEL)检测细胞凋亡的变化。结果:与假手术组比较,Western blot结果显示Mc1r在ICH后24h表达明显增加,持续到ICH后72 h,于ICH后7天恢复至正常水平;双标免疫荧光结果显示,ICH后Mc1r主要在神经元表达。小鼠ICH后表现出严重的神经功能障碍,改良Garcia和Beam balance评分降低,脑含水量增加,氧化应激相关分子MDA表达水平升高,SOD、CAT表达水平下降。给予低剂量NDP-MSH(1.5μg/只)后,神经功能评分、脑水肿程度和抗氧化应激无明显好转,但给予中、高剂量NDP-MSH(5μg/只,15μg/只)后,小鼠的神经功能评分、脑含水量和抗氧化应激状态均有较明显的提高。此外,中剂量组和高剂量组指标无明显差别。因此,选择5μg/只NDP-MSH作为下一步的治疗剂量。给予NDP-MSH(5μg/只)治疗后,小鼠ICH后的神经功能,脑水肿程度和抗氧化应激状态均有显著改善,下游相关因子和抗凋亡相关蛋白的表达升高,促凋亡相关蛋白的表达降低,神经元凋亡细胞减少。然而,敲低Mc1r或者抑制PI3K后,NDP-MSH的神经保护作用降低,下游相关因子和抗凋亡相关蛋白表达降低,促凋亡相关蛋白的表达升高,神经元凋亡细胞增加。结论:ICH后早期Mc1r表达增加,该蛋白主要表达于神经元细胞。NDP-MSH结合Mc1r能改善小鼠ICH后神经功能障碍、降低脑水肿、减轻氧化应激反应和神经元凋亡,其神经保护功能至少部分与PI3K/Akt/Nrf2信号通路的激活相关。