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目的:研究豚鼠耳蜗组织中缝隙连接结构以及连接蛋白26和32表达、分布及其意义。
方法:分别采用RT-PCR、western-blot、透射电镜、免疫组织化学和激光共聚焦双重免疫荧光染色方法观察豚鼠耳蜗中缝隙连接及连接蛋白26和32的分布情况。
结果:RT-PCR和western-blot法显示,在豚鼠内耳组织中连接蛋白26、32的基因均有表达。同时,通过透射电镜观察到在豚鼠的内耳中,尤其是在支持细胞和毛细胞间存在着大量的缝隙连接结构,该结构在高倍电镜下呈典型的7层膜结构;另外,在内螺旋沟细胞间也可见到有缝隙连接的存在。免疫组化染色显示连接蛋白26广泛分布在毛细胞和支持细胞间、螺旋缘和血管纹区域内;连接蛋白32则在毛细胞下支持细胞间质中,以及血管纹区域,而螺旋神经结处无分布;借助免疫荧光双重染色方法,我们发现两种蛋白的分布区域既有重叠,也有区别。被FITC标记的连接蛋白26在激光共聚焦显微镜下呈绿色荧光,而被cy3标记的连接蛋白32发出红色荧光,在豚鼠的内耳标本上两者的染色范围与免疫组化结果基本一致。另外,在激光共聚焦显微镜下,两种蛋白的重叠分布区域显示出黄色荧光,主要集中在豚鼠内耳中的支持细胞间、血管纹上皮和螺旋缘处。
结论:豚鼠内耳中也存在着大量的缝隙连接结构,两种连接蛋白26和32在内耳中均有存在,其中连接蛋白26是主要种类,连接蛋白32可能处于从属地位。