Rhomboid蛋白家族是近些年来才发现的，已经在古生菌、细菌、酵母菌、蜾蝇、哺乳动物，包括人，甚至植物等生物中都发现了Rhomboid蛋白同源物。虽然大多数rhomboid蛋白家族功能还未知，但是它们已经涉及到生长因子信号，线粒体作用，通过顶复合器门寄生虫侵入宿主细胞，以及在细菌中跨膜的蛋白转运。通过利用细胞膜转运机制，rhomboid蛋白家族已经被证实用以调节蛋白水解。rhomboid家族蛋白的表达受调控，而且催化底物具有特异性，这可能暗示这些蛋白质在某些重要组织中有作用，包括信号传导，发育，细胞凋亡，这是一类能够切割单一跨膜蛋白跨膜结构域的丝氨酸蛋白酶。由于许多信号蛋白都要经过膜内蛋白水解才能激活，或者转化成溶解性差、淀粉样多肽片段，因此rhomboid蛋白家族意义重大。遗憾的是目前我们仍然没有对其功能有一个很明确的认识。对于植物rhomboid家族的功能目前所知也很少。　　 蜡梅(Chimonanthuspraecox(L.)Link)原产中国，是第三纪孑遗植物和中国国家二级珍稀濒危植物。蜡梅属落叶灌木，高可达4-5米。蜡梅花在霜雪寒天傲然开放，花黄似蜡，浓香扑鼻，为典型的“冬花”植物，素有“三耐”（耐寒、耐旱、耐剪）与“三不”（冻不坏、旱不死、不缺枝）的称誉，耐寒力极强是蜡梅的最大特点，只要不低于-15℃均能露地安全越冬，是冬季观赏主要花木。蜡梅的花经加工是名贵药材，有解毒生津之效。本论文从蜡梅花器官中克隆到一个rhomboid蛋白基因CpRBL并在构建了植物载体转入烟草中表达，然后对转基因烟草进行功能分析，取得主要结果如下:　　 1.蜡梅CpRBL蛋白基因的克隆及生物信息学分析　　 通过随机挑选蜡梅cDNA文库测序，获得了大小为1347bp的EST序列，其中含有993bp的最大开放阅读框，编码330个氨基酸。BLASTX比对结果显示，该蛋白序列与其他物种rhomboid蛋白序列具有很高的同源性，并且与拟南芥rhomboid-likeprotein10同源性最高，同源性达到96％。初步断定所获得的cDNA编码rhomboid蛋白，命名为CpRBL。生物信息学分析显示，该基因编码的蛋白二级结构中不含信号肽序列，同时通过疏水性分析和跨膜结构预测发现其还含有跨膜结构域。　　 2.蜡梅CpRBL基因的表达特性分析　　 CpRBL在叶、外瓣、中瓣，内瓣、雄蕊中的表达量都很高且几乎持平，根中没有表达，然后茎中和雌蕊中表达量甚少。CpRBL在花芽期和花蕾期时表达量最少，在露瓣期表达量突然大幅度增加，然后在初开时期和盛开时期表达量逐渐降低，最后在衰败时期表达量最高。以上结果显示，它可能调控植物叶片和花的发育。蜡梅幼苗PEG、高盐处理后在不同的时间段(0.25h，1h，6h，12h)与未处理(CK)的对照植株相比较均出现基因表达下调，推测该基因在腊梅中的作用与植物的抗旱性有极大关联。　　 3.植物表达载体的构建　　 将CpRBL的最大ORF框片段连接到pMD-19T载体上，然后用XbaⅠ和SacⅠ分别双酶切克隆载体和植物表达载体pCAMBIA2301g，回收目的片段和植物表达载体空载并连接，经双酶切、单酶切和PCR验证，成功的构建了含有目的基因的植物表达载体。　　 4.转基因烟草抗性分析　　 农杆菌介导的叶盘法转化烟草，通过抗性筛选、GUS染色、目的基因PCR扩增检测以及转录水平荧光定量分析，获得转基因烟草的阳性植株。根据蜡梅内源基因CpRBL在蜡梅中表达特性分析情况，对转基因烟草进行PEG模拟干旱及高盐胁迫处理，并测定各项生理指标，发现转基因烟草的抗旱能力明显弱于野生烟草的抗旱能力。推测该基因有可能通过基因下调表达来参与植物耐旱调节，与此同时测定基因MAPKK基因在野生烟草和转基因烟草中表达量，分析得知，CpRBL基因可能通过调节MAPKK基因的表达进而参与植物的抗旱性调节。