目的：以人类免疫缺陷病毒（HIV—1）为基础构建的慢病毒载体具有感染低分裂潜能细胞、整合目的基因至靶细胞基因组并可以长期稳定表达、免疫反应轻微等优点，在临床医学和基础医学领域中有广泛的应用前景。 本系统采用“三质粒+重组痘苗病毒”的方式生产慢病毒载体，期望获得高拷贝数、安全型的适合临床应用的慢病毒载体。 方法：本系统主要生产方法为构建主框架质粒pVECRNA、包装质粒pGAGPOL及包膜质粒pVSVG。通过脂质体将这三个质粒共转染至BHK₂₁细胞，再用含有T₇RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF-3感染细胞，在生产细胞中，痘苗病毒转录翻译系统指导T₇RNA聚合酶的转录和翻译，然后T₇RNA聚合酶指导慢病毒载体cDNA的转录，痘苗病毒RNA聚合酶指导包装蛋白p24等以及包膜蛋白水泡性口炎病毒包膜蛋白（VSV-G）的转录翻译，最后由VSV-G包装慢病毒载体RNA以及功能蛋白形成慢病毒颗粒，经细胞分泌释放到培养上清中，收集培养上清经0.22μm滤膜过滤得到慢病毒载体。 结果：RT-PCR及测序比对结果提示培养上清中含有慢病毒载体的基因组RNA。当三质粒与辅助痘苗病毒共转染生产细胞BHK₂₁，48h后，共聚焦显微镜下观察到生产细胞表达p24蛋白，并且其主要分布于胞质中，而在细胞核中基本不表达，这提示质粒pGAGPOL构建成功；普通倒置荧光显微镜下观察到生产细胞表达GFP，提示质粒pVECRNA构建成功，以上结果也提示生产系统正常工作。