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目的:以肠道病毒71(EV71)的2A蛋白酶基因(2Apro)为靶序列化学合成小干扰RNA(siRNA)，转染人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD细胞)，用感染复数为0.01的EV71感染，通过检测RD细胞形态学改变、细胞活力、病毒蛋白和病毒核酸来验证siRNA-2Apro抑制EV71的能力，从而为采用RNA干扰(RNAi)技术治疗EV71感染提供一个新的潜在的靶点。 方法: (1)以EV71的2Apro基因(JN001860.1)为靶序列化学合成siRNA，并且通过BLAST检测siRNA序列对靶基因的特异性以及与人类基因的同源性。 (2)用Lipofectamine2000阳离子脂质体作为转染试剂将不同浓度FITC标记的BLOCK-iT Fluorescent Oligo转染RD细胞，通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率。 (3)将siRNA转染RD细胞，24 h后用EV71感染，观察RD细胞的形态学改变，用MTT法检测各处理组细胞活力，通过western blot和荧光定量PCR检测病毒蛋白和病毒核酸。 (4) siRNA转染RD细胞后，ELISA检测各处理组IFNα和IFNβ的水平。 结果: (1)以EV71的2Apro基因为靶序列化学合成了三个siRNA，分别命名为siRNA-69、294和319（siRNA-2Apro），经BLAST比对，显示对靶基因具有高度的特异性，与人类基因无明显同源性。 (2)通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率，发现用2μl的Lipofectamine2000脂质体，转染浓度为60 nM的BLOCK-iT Fluorescent Oligo时，转染效率达到最高，可达87％以上。 (3)从RD细胞形态学观察结果可以看出，siRNA-2Apro处理组的细胞仅发生了轻微的病变，而siRNA-SCS阴性对照组、模拟转染组和仅病毒处理组则出现了一系列较严重的形态学改变。MTT实验、western blot和荧光定量PCR检测结果表明三个siRNA都具有抑制病毒的能力，但效果具有差异，其抑制病毒能力的强弱依次为siRNA-69＞siRNA-294＞siRNA-319。 (4) ELISA检测结果显示各处理组IFNα和IFNβ水平基本一致，没有明显统计学意义，提示EV71受抑制是由于siRNA介导的RNA干扰作用产生的，而非Ⅰ型干扰素的抗病毒作用所致。 结论:以EV71的2Apro基因为靶序列化学合成的siRNA能有效地抑制EV71的增殖，因此，2Apro基因可以作为RNAi技术治疗EV71感染的一个潜在治疗靶点。