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目的:通过蛞蝓抗大鼠支气管哮喘作用和对小鼠止咳化痰作用研究,探讨其抗支气管哮喘作用机制,筛选蛞蝓止咳化痰活性成分。建立以活性成分为指标的含量测定方法,为蛞蝓质量控制体系的建立及蛞蝓药材的综合利用提供实验依据。方法:1.将40只SD大鼠随机分为6组,每组8只,分别为正常组、模型组、地塞米松组、蛞蝓高剂量组、蛞蝓低剂量组。除正常组外,其余各组于实验第1、8天腹腔注射10%OVA溶液1mL,第8天追加臀部皮下注射10%OVA溶液0.2mL致敏塑造支气管哮喘大鼠模型,正常组注射等体积生理盐水。第15天开始,将大鼠放于超声雾化箱,超声雾化喷入2%OVA生理盐水10mL激发3周,每次雾化30min,每日一次,正常组用生理盐水代替2%OVA,记录哮喘潜伏期。激发前1h,给予药物灌胃干预,给药剂量分别为地塞米松组1mg·kg-1、蛞蝓高剂量组92mg·kg-1、蛞蝓低剂量组23mg·kg-1、正常组给予同等体积生理盐水(给药体积0.01mL·g-1)。末次激发后,10%水合氯醛麻醉大鼠,按要求采集标本,采用ELISA法测定大鼠血清及BALF的LT、IL-4、IFN-γ含量;部分肺组织行病理切片,HE染色,观察肺组织结构及炎症浸润;采用免疫组化法测PTEN蛋白表达含量;采用RT-PCR法测肺组织中PTEN mRNA含量;2.取48只昆明小鼠,分为6组,每组8只,分别为正常对照组、咳必清组、蛞蝓提取物高、低剂量组、多糖高、低剂量组,灌胃给药,给药剂量分别为咳必清50mg·kg-1、蛞蝓提取物高剂量300mg·kg-1、蛞蝓提取物低剂量100mg·kg-1、多糖高剂量组200mg·kg-1、多糖低剂量组50mg·kg-1、正常组给予等体积生理盐水。给药5天后以20%氨气引咳,记录3min内小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数;取48只昆明小鼠,分组及给药剂量同上,盐酸氨溴索组给药剂量为100mg·kg-1,给药5天后腹腔注射5%酚红,检测小鼠气管段酚红排泌量,初步筛选蛞蝓止咳化痰活性成分;3.采用显微鉴别法、薄层色谱法对蛞蝓药材进行定性鉴别;参照2015年版《中国药典》四部通则下“水分检测法”、“灰分检测法”、“浸出物检测法”检测不同产地蛞蝓水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物等相关项目;采用苯酚-硫酸比色法,对不同产地蛞蝓药材多糖含量进行测定。结果:1.与模型组相比,地塞米松组、蛞蝓高剂量组均能延长大鼠哮喘潜伏期（P<0.05）;与正常组比较,模型组大鼠血清及BALF中LT、IL-4含量增加,IFN-γ含量减少（P<0.05）;与模型组比较,地塞米松组、蛞蝓提取物高组大鼠血清中LT、IL-4含量明显下降,IFN-γ含量上升（P<0.05）;地塞米松组、蛞蝓提取物高、低剂量组大鼠BALF中LT、IL-4含量明显下降,IFN-γ含量上升（P<0.05）;HE染色可见,正常组大鼠肺组织、支气管上皮结构完整,管腔内无炎症物质渗出,肺泡大小正常,无粘连,无炎性分泌物;模型组大鼠支气管上皮可见明显脱落坏死,支气管壁增厚,支气管周围炎性浸润严重,管腔变小,腔内炎症物质聚集,肺泡壁粘连增厚,肺泡数减少,肺泡腔内可见炎性分泌物;地塞米松组、蛞蝓高和低剂量组支气管壁轻度增厚,腔内炎性物质减少,支气管上皮无脱落坏死,肺泡壁粘连减轻;大鼠肺组织支气管PTEN蛋白表达免疫组织化学染色结果显示,正常组大鼠肺组织支气管周围PTEN大量表达,地塞米松组,蛞蝓提取物高剂量组PTEN蛋白表达减少,蛞蝓低剂量组、模型组肺组织PTEN蛋白表达呈弱阳性;PCR结果显示,与模型组相比,地塞米松组、蛞蝓高剂量组大鼠肺组织PTEN mRNA含量增多（P<0.05）。2.与正常对照组相比,咳必清组、蛞蝓提取物组、多糖组小鼠咳嗽次数明显减少、咳嗽潜伏期延长（P<0.05）;与正常对照组相比,盐酸氨溴索组、多糖高剂量组小鼠酚红排泌量明显增加（P<0.05）;3.采用显微鉴别、薄层鉴别法对不同产地的蛞蝓进行定性鉴别,结果显示不同产地的蛞蝓性状特征,斑点位置、颜色均大致相同;不同产地蛞蝓各项检查项目符合规定;建立了采用UV法测定蛞蝓多糖含量测定方法,方法学考察结果显示该方法精密度、稳定性、重复性和加样回收试验均符合《中国药典》相关标准。结论:1.通过建立支气管哮喘大鼠模型,考察蛞蝓提取物对支气管哮喘的治疗作用,结果显示蛞蝓提取物抗支气管哮喘效果显著,其作用机制可能与影响Th1/Th2细胞因子平衡,上调PTEN表达有关;2.蛞蝓具有明显止咳化痰作用,初步确定蛞蝓的止咳化痰主要活性成分为多糖;3.建立了蛞蝓鉴别方法;制定了蛞蝓水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的参考限量;建立了蛞蝓多糖含量测定方法。