论文部分内容阅读
在各种各样的微生物多糖中,粘多糖被认为是一类最具有发展前途的活性物质。粘多糖是由糖醛酸和氨基己糖交替连接组成的,有时还含有硫键。由于粘多糖独特的理化性质及生物活性,目前应用在美容、石油、医疗等各个领域。本文研究的内容主要包括:粘多糖A发酵条件的优化,粘多糖A的分离纯化,粘多糖的结构研究三个部分。从刚宰杀牛的牛鼻中刮取活性较强的鼻粘膜,采集筛选诱变获得一株高产新型粘多糖的兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)BU100,并将这种新型粘多糖命名为粘多糖A。作者在已有研究的基础上,对培养基的成分进行了优化,确定了最优的发酵条件。使用5L发酵罐扩大培养后,发酵液中粘多糖A的含量为12.48g·L-1。使用乙醇对发酵后的发酵液絮凝脱色得到粘多糖A粗品。用一定浓度的氯化钠溶液重新溶解粘多糖A粗品,硅藻土吸附板框过滤除去发酵液中的菌体以及菌体碎片等体积的较大不溶性杂质,考察了吸附过程中菌体和粘多糖A的含量变化。使用Sevage法联合其他方法去除板框过滤后液体中的可溶性蛋白质,根据蛋白质的去除率和粘多糖A的损失率得到最优的除蛋白方法是冻融-Sevage法,最后通过乙醇絮凝,真空干燥得到了纯度高达96.98%(m/m)(m/m)的粘多糖A产品。使用咔唑法和Elson-Morgan法对粘多糖A进行检测,并针对发酵粘多糖A中的主要杂质-蛋白质,使用灵敏度在0~1000μg/mL的考马思亮蓝法对粘多糖A产品中蛋白质含量进行了检测。检测结果粘多糖A中糖醛酸和氨基糖的摩尔比例接近1:1,蛋白含量符合标准(<0.1%)的要求。进一步运用红外光谱分析,核磁共振光谱分析,圆二色扫描,刚果红实验等仪器分析手段对粘多糖A含有的官能团以及组成单元的连接键进行了分析,最终验证和鉴定了粘多糖A为全部由1-4糖苷键连接的葡糖醛酸和氨基葡糖的多聚糖。