【摘 要】
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为了进一步研究胞外CaM与胞内CaM有无亚型差异,该文设计实验制备大豆不同亚型CaM的特异单克隆抗体并对其性质及功能进行研究,为定位研究并找到胞外CaM基因打下基础.首先通过P
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为了进一步研究胞外CaM与胞内CaM有无亚型差异,该文设计实验制备大豆不同亚型CaM的特异单克隆抗体并对其性质及功能进行研究,为定位研究并找到胞外CaM基因打下基础.首先通过PCR及RT-PCR的方法扩增大豆不同亚型CaMcDNA,将其构建到表达载体pET-28b(+)上,把重组的表达载体转化到大肠杆菌中,IPTG诱导蛋白的表达.通过phenyl-Sepharose疏水亲和层析柱和G-75层析柱,提取纯化各亚型SCaMs,经SDS-PAGE,硝酸银染色一条带,证明所得蛋白达到制备特异抗体所需的纯度.SDS-PAGE检测Ca<2+>对各亚型SCaMs电泳迁移率的影响.通过微机预测并分析钙调素分子的表位,结果显示该分子上有7个表位,其中至少有3个表位可激发特异性抗体.以烟草花粉为材料,初探不同亚型SCaMs及其特异抗体对花粉萌发的影响,结果表明不同亚型SCaMs对烟草芬粉的萌发都有促进作用,其中SCaM-1的促进幅度最大;外加特异抗体抑制花粉萌发,其中抗SCaM-1特异抗体的抑制程度远远高于SCaM-5特异抗体,说明不同亚型SCaMs在花粉萌发的过程中起的作用不同.由上述结果表明所得的抗体具有特异性可以用于定位研究.
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