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小熊猫是一种濒危野生动物，其进化史在高等肉食类类熊科动物的进化中扮演着重要的角色，其在动物分类学、系统进化学及生态学等领域都具有十分重要的研究价值。为了在细胞水平上长期保存小熊猫这一珍稀物种，同时也为构建小熊猫异种克隆胚提供供体细胞，本研究采集一5岁雌性小熊猫耳组织，以低糖DMEM为基础液，添加20％FBS作为原代细胞培养液，添加10％FBS作为传代细胞培养液，应用组织块培养法培养小熊猫成纤维细胞到10代；同时在基础培养液中添加20％FBS、8％DMSO作为冷冻保护剂，以4℃平衡30min、-80℃冰箱过夜、最后投入液氮作为冷冻程序，对小熊猫成纤维细胞进行了冷冻保存。本研究成功的建立了小熊猫成纤维细胞系，观察结果表明细胞形态与生长发育情况良好；冷冻保存的第三代细胞解冻后再培养，其生长曲线符合贴壁细胞的生长规律，培养至96h时，细胞贴壁率达到100％。为获得构建小熊猫异种重构胚所需的卵母细胞，本研究采用超数排卵技术对日本大耳兔进行超数排卵，并比较了不同超数排卵方案的效果。结果表明，四种不同剂量组合的“eCG肌肉注射+hCG静脉注射”的兔超数排卵方案的平均获卵数差异显著，而获得的可用卵数(MⅡ期卵母细胞)差异不显著，其中以eCG 120IU、hCG 180IU超排效果最好，平均可获卵16.3枚，MⅡ期卵母细胞率达97.3％。为探讨小熊猫-兔异种克隆的可能性，本研究以解冻的小熊猫成纤维细胞为供体以免卵母细胞为受体，通过核移植构建了194枚小熊貓-兔异种重构胚，对重构胚进行电融合、激活和培养。融合参数：两次140v／mm、80μs的直流电脉沖，间隔1s；激活方法：5μM离子霉素4～5min、2mM 6-DMAP 4h；培养液：HTF。同时以25枚注射小熊猫体细胞后的兔卵母细胞不经过融合而直接激活作为对照。结果显示：实验组小熊猫-兔异种重构胚，有137枚分裂，卵裂率70.61％；有64枚发育到桑椹胚，桑椹胚率46.72％：有31枚发育到囊胚，囊胚率22.63％；对照组仅有1枚分裂并发育到桑椹胚，其卵裂率极显著地低于实验组。结果表明：兔卵母细胞胞质可以支持小熊猫成纤维细胞核子的重编程及进一步的胚胎发育。