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目的研究大黄素对酒精诱导的小鼠肝纤维化的影响,旨在探索大黄素对酒精性肝纤维化的防治作用及调控的机制。方法（一）体外实验:主要研究大黄素对酒精诱导的活化肝星状细胞（hepaticstellate cells,HSC）的影响。首先培养大鼠的HSC-T6,并将其分为5组,正常对照组:不作处理;酒精组:用含酒精的培养液刺激HSC活化;低、中、高浓度大黄素组:在含酒精的培养液中刺激HSC活化后,应用低、中、高浓度的含大黄素培养液培养HSC。采用MTT法和流式细胞术检测各组HSC的增殖及凋亡情况;免疫蛋白印迹和实时定量PCR（q RT-PCR）分别检测各组细胞中ADAMTS-1、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白和miR-21 m RNA的表达。（二）体内实验:选择C57BL/6N小鼠50只进行随机分为5组:正常对照组、酒精组、低、中和高三个剂量大黄素干预组,每组各10只。正常对照组喂养对照液体饲料（Lieber-De Carli,TP4030C）8周,其余各组喂养5%的酒精液体饲料（Lieber-Decarli,TP4030A）联合31.5%乙醇灌胃（每周两次,5g/kg）条件下8周,从喂养的第五周开始,正常组和酒精组每天用等体积0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液灌胃,三个剂量大黄素干预组每天分别灌服大黄素10、20、40mg/kg,共持续四周。第八周末小鼠进行眼球取血检测血清谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）的活性;随后立即处死各组小鼠取肝脏,应用石蜡包埋、组织切片,然后进行苏木素-伊红染色（Hematoxylin-Eosin Staining,HE）、糖原（Schiff periodic acid shiff,PAS）染色、苦味酸-天狼猩红染色、油红染色,分别检测小鼠肝脏的病理、糖原含量、胶原纤维以及脂滴的变化情况;免疫蛋白印迹和q RT-PCR分别检测各组小鼠肝脏组织中ADAMTS-1、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白和miR-21 m RNA的表达。结果体外实验:1.MTT结果显示:与酒精组相比,不同浓度的大黄素培养基培养活化的肝星状细胞48h后,细胞的增殖能力较酒精组均显著下降（P＜0.01）,且随着给药浓度的增加,大黄素对活化肝星状细胞增殖的抑制作用逐渐增加,呈现一定的浓度依赖性;2.细胞凋亡检测结果显示:细胞凋亡率在正常对照组与酒精组之间无明显差异,而低、中、高浓度大黄素组的HSC-T6凋亡率均明显高于正常对照组和酒精组（P＜0.05或P＜0.01）,且随着大黄素浓度的升高,细胞凋亡率逐渐增加,呈浓度依赖性;3.细胞免疫印迹和q RT-PCR检测结果显示:与正常对照组相比,酒精组细胞中α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、TIMP-1、PDGF-B、CTGF、ET-1、TGF-β1、Smad3蛋白和miR-21 m RNA表达均显著升高（P＜0.01）,而ADAMTS-1、MMP-2蛋白表达显著降低（P＜0.01）;与酒精组相比,通过低、中、高浓度含药大黄素培养液干预后,细胞中α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、TIMP-1、PDGF-B、CTGF、ET-1、TGF-β1、Smad3蛋白和miR-21 m RNA表达均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,而ADAMTS-1、MMP-2蛋白表达显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,且随着大黄素浓度的增加,这种干预作用显著增加。体内实验:1.血清学指标检测结果显示:与正常对照组相比,酒精组小鼠血清学指标ALT和AST活性显著升高（P＜0.01）;与酒精组相比,经过低、中、高剂量大黄素灌胃后,小鼠血清学指标ALT和AST活性明显下降（P＜0.05或P＜0.01）,而且随着大黄素剂量的增加,两种酶活性下降更为显著;2.小鼠肝组织形态学染色结果显示:与正常对照组相比,酒精组小鼠HE染色坏死积分、肝纤维化程度、脂滴的含量均显著升高（P＜0.01）,而糖原的含量则明显降低（P＜0.01）;与酒精组相比,经过低、中、高剂量大黄素灌胃后,HE染色坏死积分、肝纤维化程度、脂滴的含量均逐渐显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,而糖原的含量也逐渐明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;3.肝组织蛋白免疫印迹和q RTPCR检测结果显示:与正常对照组相比,酒精组小鼠肝组织中α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、TIMP-1、PDGF-B、CTGF、ET-1、TGF-β1、Smad3蛋白和miR-21 m RNA表达均显著升高（P＜0.01）,而ADAMTS-1、MMP-2蛋白表达显著降低（P＜0.01）;与酒精组相比,经过低、中、高剂量大黄素灌胃后,肝组织中α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、TIMP-1、PDGF-B、CTGF、ET-1、TGF-β1、Smad3蛋白和miR-21 m RNA表达均逐渐显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,而ADAMTS-1、MMP-2蛋白表达逐渐显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论1.大黄素对酒精性肝纤维化有较好的治疗作用。2.在酒精诱导小鼠肝纤维化的过程中,大黄素的干预:（1）可下调肝星状细胞中miR-21的表达,上调ADAMTS-1的表达,进而抑制TGF-β1/Smad3信号通路,从而发挥抗酒精性肝纤维化的作用;（2）降低肝脏中TIMP-1的表达,促进MMP-2的表达,加速细胞外基质的降解,起到抗酒精性肝纤维化的作用。