【摘 要】
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目的:探讨Cx43在肺动脉高压（pulmanory arterial hypertension,PAH）中的作用及其相关机制。方法:1、通过慢性低氧和腹腔注射野百合碱（MCT,60mg/kg）建立大鼠PAH模型。观察各组大鼠的一般情况,计算右心室肥厚指数（RVHI）,HE染色观察肺血管病理变化,Western blot检测Cx43的表达水平。2、慢病毒载体敲低Cx43对MCT诱导的PAH大鼠肺动脉
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO:00020906）
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目的:探讨Cx43在肺动脉高压（pulmanory arterial hypertension,PAH）中的作用及其相关机制。方法:1、通过慢性低氧和腹腔注射野百合碱（MCT,60mg/kg）建立大鼠PAH模型。观察各组大鼠的一般情况,计算右心室肥厚指数（RVHI）,HE染色观察肺血管病理变化,Western blot检测Cx43的表达水平。2、慢病毒载体敲低Cx43对MCT诱导的PAH大鼠肺动脉重构的影响。雄性SD大鼠,分为四组:对照组（Cont）、MCT组、Cx43-RNAi-LV+MCT干扰组（RNAi）和NC-GFP-LV+MCT组（NC）,每组6只。在MCT处理前经尾静脉注射慢病毒载体1× 108TU,每周1次,共2次。HE染色观察大鼠肺动脉血管结构变化,免疫组织化学法检测肺动脉Cx43的表达情况,Western blot检测Cx43的表达水平。3、低氧条件下HIF-1α抑制剂棘霉素对Cx43转录表达及对PASMCs细胞增殖的影响。PASMCs 分成三组:对照组（Cont）、低氧组（Hypoxia,CoC1250μmol/L,24h）、棘霉素+低氧处理组（Ech+Hypoxia 组,Ech 100nmol/L）。通过 RT-PCR 检测PASMCs细胞中Cx43的mRNA转录水平,Western blot检测Cx43表达情况。采用MTT实验检测各组PASMCs在培养24、48和72 h的增殖情况。结果:1、与对照组相比,低氧组和MCT组大鼠渐渐出现毛色变暗,食欲下降,体重增加缓慢;与对照组相比,低氧组、MCT组RVHI显著增高（p<0.001）;与对照组相比,低氧组和MCT组大鼠肺小动脉管壁明显增厚、管腔明显狭窄,发生肺血管重构;低氧组、MCT组Cx43蛋白表达量与对照组相比显著上调（p<0.05）。2、HE染色显示,与对照组比较,MCT组和NC-GFP-LV+MCT组新内膜向管腔内弥漫性增生,血管壁增厚,管腔明显狭窄,Cx43-RNAi-LV+MCT干扰组新内膜增生与MCT组相比明显减轻;免疫组化结果显示,与对照组比较,MCT组和NC-GFP-LV+MCT组肺小动脉Cx43蛋白阳性表达密度显著增大,Cx43-RNAi-LV+MCT干扰组Cx43蛋白阳性表达密度与模型组相比明显降低;Western blot检测显示,MCT组Cx43蛋白表达量与对照组相比显著增加（p<0.05）,Cx43-RNAi-LV+MCT干扰组与MCT组相比Cx43蛋白表达量显著降低（p<0.05）。3、RT-PCR实验发现,低氧处理能显著增加PASMCs细胞中Cx43的mRNA转录水平,HIF-1α抑制剂棘霉素预处理后,能显著抑制低氧诱导的Cx43 mRNA升高（p<0.05）;Western blot检测发现,低氧能上调Cx43在PASMCs细胞中的表达水平,棘霉素能明显抑制低氧诱导的Cx43表达上调（p<0.05）;MTT实验发现,低氧条件下PASMCs的增殖能力显著增强,而棘霉素也能显著抑制低氧诱导的PASMCs增殖（p<0.05）。结论:1、建立了低氧和MCT诱导的大鼠PAH模型,PAH模型大鼠肺小动脉发生重构,Cx43表达水平明显升高。2、Cx43-RNAi-LV能显著抑制PAH模型大鼠肺动脉血管重构及Cx43蛋白高表达,表明Cx43参与了 PAH肺血管重构的病理过程。3、低氧条件下HIF-1α参与调控肺动脉平滑肌细胞中Cx43基因表达和PASMCs的增殖。提示HIF-1α可能与Cx43参与PAH肺血管重构有关。
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