第一部分:子宫内膜异位症中RNA m6A修饰水平的检测及催化基因的筛选目的:研究RNA m6A修饰在子宫内膜异位症（内异症）在位和异位子宫内膜组织中的表达水平以及m6A催化基因的筛选方法:采集50例单纯因输卵管因素不孕患者的增生期子宫内膜作为正常对照组。采集卵巢巧克力囊肿患者的增生期在位内膜25例和异位内膜23例。对这些采集到的组织进行RNA抽提,并对抽提得到的总RNA进行m6A定量检测。RT-PCR检测三种组织中METTL3、METTL14、ALKBH5、FTO的m RNA表达水平。Western blot和免疫组织化学染色法（IHC）检测METTL3的蛋白表达水平。m6A斑点杂交实验检测METTL3与m6A修饰的关系。结果:m6A定量检测结果显示:内异症患者在位内膜和异位内膜的m6A水平明显低于正常对照组,而在位内膜与异位内膜之间的m6A水平无显著性差异。RT-PCR结果显示:内异症患者在位和异位子宫内膜组织METTL3 m RNA表达水平显著低于对照组,而在位内膜与异位内膜组织之间METTL3 m RNA的表达无显著性差异。METTL14、FTO、ALKBH5的m RNA水平在三种组织间均无显著性差异。Western结果显示:内异症患者的在位和异位内膜组织METTL3蛋白表达水平显著低于对照组,而在位与异位内膜组织之间METTL3的表达无显著性差异。IHC结果显示:METTL3主要定位在子宫内膜上皮细胞和基质细胞的细胞核内,内异症患者的在位和异位内膜组织METTL3的表达水平显著低于对照组,而在位与异位内膜组织之间METTL3的表达无显著性差异。m6A斑点杂交实验结果显示:在子宫内膜基质细胞系（HESCs）中过表达METTL3后,m6A修饰水平明显增高;敲低METTL3后,m6A修饰水平明显下降。结论:内异症患者在位内膜和异位内膜m6A修饰水平和METTL3表达较正常子宫内膜均明显下降,而METTL3是内异症m6A修饰水平下降的关键原因。第二部分:METTL3通过DGCR8调控pri-miR-126的成熟参与子宫内膜异位症发生发展的机制研究目的:1.研究METTL3在促进内异症子宫内膜基质细胞侵袭和转移中的作用2.探讨METTL3通过DGCR8调控pri-miR-126的成熟影响内异症子宫内膜基质细胞侵袭和转移的分子机制方法:1.在HESCs细胞中过表达和敲低METTL3,利用Transwell小室检测HESCs细胞的侵袭和迁移能力2.选择文献报道的10个pri-miRNA上带有m6A标记的miRNA,RT-PCR检测正常子宫内膜、内异症在位和内异症异位内膜组织中miRNA的表达量。3.在HESCs细胞中敲低和过表达METTL3,RT-PCR检测miR-3609、miR-93、miR-126的表达。RT-PCR检测METTL3敲低和过表达后HESCs细胞中pri-miR-126的表达水平。4.在过表达METTL3的HESCs细胞中加入miR-126的抑制剂,在敲低METTL3的HESCs细胞中加入miR-126的模拟物,分别检测各自HESCs细胞的侵袭和迁移能力。5.CO-IP实验检测HESCs细胞中METTL3是否能够与DGCR8结合,进而参与pri-miRNA的成熟进程。结果:1.过表达METTL3的HESCs细胞的侵袭和迁移能力显著下降;敲低METTL3的HESCs细胞的侵袭和迁移能力则显著增强。2.对比正常子宫内膜组织,miR-3609、miR-93、miR-126三个miRNA在内异症在位和异位内膜组织中表达显著下降。3.miR-126在METTL3敲低的HESCs细胞中表达显著下降,在METTL3过表达的HESCs细胞中表达显著增高,而miR-3609和miR-93的表达水平在过表达和敲低METTL3的HESCs细胞中无变化。4.敲低METTL3后pri-miR-126呈现明显的上调趋势,而过表达METTL3后,pri-miR-126呈现明显的下降趋势。5.miR-126的抑制剂削弱了过表达METTL3对HESCs细胞侵袭和迁移能力的抑制作用,而miR-126的模拟物减弱了敲低METTL3对HESCs细胞侵袭和迁移能力的增强作用。6.METTL3能够结合DGCR8分子,其结合可能部分由RNA介导。结论:METTL3通过调控DGCR8参与pri-miR-126的成熟进程,增加成熟miR-126的产生,最终影响内异症的侵袭和迁移。