视网膜色素上皮细胞在有色光信号传导中的作用

来源 :复旦大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:gliu0307
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目的:研究视网膜色素上皮细胞在有色光信号传导中的作用,试从细胞生物学水平和分子生物学水平探讨近视眼的发病机制。方法:酶分层消化法分离培养人胚和成人RPE细胞,通过生长数据的计算和生长曲线的绘制、形态学和免疫学鉴定、透射电镜检查等方法分析RPE细胞的生物学特性;将人胚RPE细胞置于不同有色光线下培养,通过生长曲线的绘制、流式细胞测定细胞周期等研究不同色光对人胚RPE细胞体外生长特性的影响;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定不同有色光线下培养的RPE细胞分泌的bFGF和TGF-β的量,并抽提细胞的总RNA,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测不同色光照射后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平,从而分析体外培养的RPE细胞在光信号传导中的作用;通过对不同色光下饲养的幼豚鼠眼轴的测量、神经视网膜层和视网膜色素上皮层中bFGF和TGF-β的检测,探讨不同波长的有色光线对眼球生长发育的影响,并进一步分析动物模型中RPE细胞在有色光信号传导中的作用。结果:体外培养的人胚RPE细胞生长旺盛,超微结构仍保持正常;不同有色光线下培养的RPE细胞周期和生长曲线均不同;ELISA结果显示人胚RPE细胞可分泌bFGF和TGF-β,在受到不同波长的光照射后,不同时段bFGF和TGF-β的分泌量也不一样,从不同色光照射24后的RPE细胞中提取总RNA,并以TGF-β为目的基因进行扩增,结果显示不同色光照射后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平不同;不同色光下饲养4周后幼豚鼠红光照射组眼轴长度的变化与对照组相比差异有统计学意义,豚鼠视网膜各层均表达bFGF和TGF-β,红光照射组视网膜各层bFGF和TGF-β的mRNA表达量均较高。结论:通过本课题的一系列逐步深入的研究工作,明确了RPE细胞的生物学特性及其在眼球生长发育中的作用,为阐明近视眼的发病机制奠定了基础。
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