论文部分内容阅读
诸多研究显示,表达失调的microRNA的在恶性肿瘤中发挥癌基因(oncomiRs)或抑癌基因(tumor suppressors)作用。然而,关于microRNA (miRNA)在预测化疗药物的临床疗效方面的研究尚未见报道。因此,本项研究着重探讨microRNA-21(miR-21)的表达水平与接受肝动脉灌注5-氟尿嘧啶和吡柔比星进行化疗的肝细胞癌患者预后的关系。利用quantitive Real-time PCR (qRT-PCR)分别测定经顺铂、5-氟尿嘧啶、吡柔比星处理的肝癌细胞系以及肝癌组织样本中成熟和初始miR-21水平；并利用细胞凋亡和体外侵袭实验,观察过表达或低表达miR-21肝癌细胞在经化疗药物处理后其细胞生长和侵袭能力的变化；此外,利用免疫印迹和免疫组织化学分析方法,在肝癌细胞系及肝癌组织标本中确定Activating rotein-1(AP-1)miR-21及其靶标之间的关系。结果显示,miR-21低表达的肝癌患者无病生存期更长、复发率较低；过表达miR-21可导致肝癌细胞对化疗产生抵抗,而敲低肝癌细胞内源性miR-21的表达水平,则能增强对其对化疗药物的敏感性；细胞及组织水平的相关性研究显示,AP-1-miR-21通路是肝癌HAIC化疗(5-氟尿嘧啶和吡柔比星)的靶标,miR-21可做为经HAIC治疗的肝癌患者预后评估的标志物。目的评估nyoD-micoRNA-29家族在L6成肌细胞分化为肌管过程中及L6在接受葡萄糖和胰岛素治疗处理时的表达谱,并进一步探讨myoD调控miR-29簇表达的分子机制。方法采用实时Real-PCR和Western blot分析MyoD和miR-29家族的表达情况。利用Promotor scan和transcriptional factor search预测miR-29簇的潜在启动子和转录因子结合位点。miR-29b1-α和miR-29b2-C簇的启动子序列被克隆至荧光素酶报告质粒,通过双荧光素酶报告基因分析myoD调节作用。电泳迁移率变动分析用以指示myoD结合的特定序列。此外,通过重组腺病毒系统(AD-myoD)使得MyoD过表达,之后转染L6细胞,利用Real-time PCR检测miR-29b中和miR-29c的表达。结果当L6成肌细胞分化为肌管,其细胞中MyoD、miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达水平升高。当用葡萄糖和胰岛素L6肌管时,MyoD、miR-29b和miR-29c的表达上调,但miR-29a的表达无显著变化。双荧光素酶报告基因实验表明myoD是miR-29b2-C表达的正向调控因子,其可结合niR-29b2-C簇启动子区的特定序列。MyoD的过表达能使L6细胞的miR-29b和miR-29c的表达水平显着增加。结论myoD可正向调控L6细胞中miR-29b2-C的表达。