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为了解广东地区禽网状内皮组织增殖病的流行状况,2008～2011年本研究采用ELISA方法对11个鸡场共1280份血清样品进行调查。结果显示鸡场REV阳性率100％(11/11),个体阳性率为23.05%(295/1280)。各日龄的鸡均检测出了REV抗体,抗体阳性率为8.97%～40.91%,其中检测出REV抗体的最小日龄为1日龄;从14周龄开始,鸡群REV抗体阳性率随着日龄的增加而增高,而在56周龄时阳性率则有所下降。通过对其中的8个鸡场不同性别的鸡进行REV抗体检测,发现不同性别的鸡REV抗体可呈显著的差异;对同一鸡场不同日龄不同鸡舍的鸡群REV抗体进行检测,发现该场不同鸡舍的REV抗体阳性率可呈显著差异,在4.26%～93.33%之间。
本研究利用细胞培养、聚合酶链式反应(PCR)以及特异性免疫荧光试验(IFA)从送检的疑似禽网状内皮组织增殖病感染的临床样品中分离鉴定出1株禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)。通过分段扩增的方法,完成了该分离株的前病毒基因组核苷酸序列测定,GD09株的前病毒全基因组长度为8295bp。通过对GD09株前病毒全基因组序列分析,结果表明GD09株的前病毒基因组大体结构为5-LTR-gag-pol-env-LTR-3,符合典型的复制完全型反转录病毒的特点,其核苷酸序列没有原癌基因的插入;将该分离株的群特异性gp90基因序列与国内外各参考株进行相似性和遗传进化分析,结果表明GD09株与参考株REV-T相应的gp90序列相似性最高,为99.9%;与我国分离株HA9901和美国参考株REV-T亲缘关系最近。
本实验利用REV SNV株前病毒全基因组cDNA,经PCR扩增获得覆盖该毒株前病毒全基因组的四个片段,成功地构建了SNV株的重组质粒pSNV。然后将重组质粒转染DF-1细胞并连续盲传,用RT-PCR方法可以在转染后盲传的细胞中检查到REV-LTR片段,但利用针对REV特异性单抗的IFA方法进行检测时,发现在前三代细胞中检测到绿色荧光。