目的:本研究包括临床研究和动物实验研究。临床研究中回顾了重症肌无力患者中医证型及西医分型与胸腺瘤的相关性,为临床治疗提供依据。通过比较重症肌无力患者与健康志愿者外周血单个核细胞过氧化物酶增殖激活受体γ-辅助激活因子-1 α(peroxisome prolifetatoractivated receptor-gamma coactivator-1 alpha,PGC-1α)mRNA表达的差异,探讨外周血中PGC-1 α表达变化与重症肌无力发病关系;动物实验研究通过复制实验性自身免疫性重症肌无力大鼠模型,观察重症肌无力模型大鼠骨骼肌、线粒体及神经肌肉接头处超微结构的变化,并检测大鼠骨骼肌PGC-1α、细胞核呼吸因子1(nuclear respiratory factor1,NRF1)及线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,Tfam)mRNA 表达及强肌健力方对其影响,进一步从调控线粒体生物合成的相关通路方面对重症肌无力的发病机制及健脾益气法对其影响的作用机制进行探讨,为健脾益气法治疗重症肌无力提供实验依据。方法:1.临床回顾性研究通过查阅2011年9月至2016年1月广州中医药大学第一附属医院脾胃病科住院患者的电子病历,收集符合诊断标准、纳入标准及排除标准的重症肌无力患者,记录年龄及性别等一般资料、临床分型(Ⅰ型、Ⅱa型、Ⅱb型、Ⅲ型、Ⅳ型),按患者首次住院时的症状体征及舌脉情况对其进行辨证分型,分为脾胃气虚、脾虚湿热、脾肾亏虚三型。探讨患者中医证型、西医分型与胸腺瘤的相关性。2.临床实验研究临床研究病例标本来源于2015年11月至2016年01月于广州中医药大学第一附属医院脾胃病科住院的病例,共收集脾胃气虚证重症肌无力患者8例,记录患者的一般资料,并在本校师生志愿者中招募健康志愿者8名作为对照组。各受试对象均抽取空腹外周静脉血4 mL,分离单个核细胞,采用聚合酶链反应PCR(polymerase chain reaction,PCR)方法检测PGC-1 α mRNA的表达,比较两组间PGC-1 α mRNA的表达差异。3.动物实验研究选用SPF级6周龄Lewis雌性大鼠72只,随机选取10只作为正常组正常饲养,其余62只以皮下多点注射人工合成的鼠源性乙酰胆碱α亚基97～116肽段制作实验性自身免疫性重症肌无力大鼠模型,第6周末造模结束时,实验大鼠剩余54只,经肌电图检测后,确定成模43只,采用随机数字表法随机抽取8只正常组大鼠及32只模型组大鼠,将模型组大鼠分为模型组、强肌健力方高、中、低剂量组,每组各8只。成模2周后予中药灌胃治疗,正常组、模型组予等量生理盐水灌胃,治疗组给予强肌健力方,剂量分别为23.4 g/kg · d、15.6 g/kg · d、7.8 g/kg · d。以上各组灌胃液体量为10 mL/kg体重,每日给药一次,其浓度及等效剂量按体重折算,共给药4周。实验结束后观察记录大鼠一般情况及体重,电镜下观察各组大鼠骨骼肌、线粒体及神肌肉接头处超微结构的变化,PCR法检测大鼠骨骼肌PGC-1α、NRF-1及Tfam mRNA表达的变化,比较各组之间的差异。结果:1.临床研究1.1本研究共纳入患者159例,平均发病年龄为40.39± 15.48岁,男女发病比例为1:1.65,女性患者占62.26%,中度全身型占49.06%。1.2在纳入的患者中,舌质淡红者67例,淡胖者16例,共占52.2%,舌苔中白苔58例,白腻苔35例,薄白苔29例,共占76.73%。脉象中出现最多的为细脉,共111例,占69.81%。中医证型中,脾胃气虚证所占比例最高,达52.72%,脾肾亏虚证占23.27%,脾虚湿热证占22.01%。1.3 159例患者中合并胸腺瘤的患者共76例,占47.8%。脾肾亏虚证合并胸腺瘤者24例,占此证型患者的64.86%。Ⅱb型患者78例,合并胸腺瘤共54例,占69.23%。1.4脾胃气虚组重症肌无力患者外周血中PGC-1 α mRNA表达明显低于正常对照组,具有统计学意义(P<0.05)。2.动物实验研究2.1造模开始后,模型组大鼠毛色枯黄,体重显著下降(P<0.05)。中药干预后,大鼠皮毛色泽改善,治疗组大鼠体重上升,仍小于正常组(P<0.05);低剂量组与中剂量组比较,体重有显著差异(P<0.05);中剂量组与高剂量组比较,体重无差异(P>0.05)。2.2骨骼肌、线粒体及神经肌肉接头处电镜观察:正常组大鼠肌纤维Z线排列整齐,线粒体数量正常,结构完整,神经肌肉接头与肌肉链接处突触褶未见明显异常;模型组可见肌纤维紊乱,肌膜皱缩呈锯齿状,线粒体数目减少,结构出现肿胀、空泡化、嵴断裂,神经肌肉接头突触褶排列紊乱、溶解、消失周围可见红泡化线粒体;强肌健力方方治疗后大鼠肌纤维Z线排列整齐,肌膜下可见正常线粒体分布且线粒体数量增多,空泡化减少,神经肌肉接头处突触褶接近正常,周围可见结构完整线粒体分布。2.3模型组大鼠骨骼肌PGC-1 α、NRF-1、Tfam mRNA表达较正常组大鼠显著降低(P<0.05)。2.4中药干预后,强肌健力方高、中、低剂量组大鼠骨骼肌PGC-1 α mRNA表达均升高,与模型组大鼠相比有显著性差异(P<0.05);高、中、低剂量组之间比较无差异(P>0.05)。2.5中药干预后,强肌健力方高、中、低剂量组大鼠骨骼肌NRF-1、Tfam mRNA表达均有升高趋势,但与模型组比较无显著性差异(P>0.05),高、中、低剂量组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:1.临床研究1.1重症肌无力发病以女性患者为多见,分型以中度全身型多见。重症肌无力患者的舌脉以淡舌、白苔、细脉最常见。本病主要归为三种证型:脾胃气虚证、脾肾亏虚证及脾虚湿热证,说明脾胃虚损是本病主要病机。1.2在合并胸腺瘤的患者中,以脾肾亏虚证最常见,而脾胃气虚证患者合并胸腺瘤比例显著低于另外两种证型;Ⅱb型患者合并胸腺瘤比例显著高于Ⅰ型、Ⅱa型,反映了胸腺瘤与疾病严重程度相关。1.3外周血中PGC-1α mRNA表达异常可能在重症肌无力患者的发病中起着一定作用。2.动物实验研究2.1皮下多点注射鼠源性乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段可成功复制实验性自身免疫性重症肌无力大鼠模型。2.2强肌健力方可改善实验性自身免疫性重症肌无力模型大鼠的肌无力症状、皮毛色泽并增加大鼠体重。2.3实验性自身免疫性重症肌无力大鼠存在骨骼肌纤维及神经肌肉接头处结构紊乱、线粒体结构和数量异常,强肌健力方能在一定程度上改善骨骼肌、线粒体及神经肌肉接头处超微结构改变。2.4实验性自身免疫性重症肌无力大鼠PGC-1α、NRF-1、TfammRNA表达明显降低,经强肌健力方干预后均升高,说明三者在重症肌无力的发病中起着重要作用,强肌健力方主要是通过提高三者的表达发挥作用。