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雄性哺乳动物精子的发生、成熟是一个非常复杂的过程,精细胞需要经过变态发育而成熟,研究发现许多基因参与这一生理过程;雌性哺乳动物卵泡发育和闭锁是决定配子发育成熟的关键因素。Elk1是MAPK级联反应的作用底物,MAPK级联反应可以磷酸化Elk1,进而激活c-fos的启动子,参与调控细胞的增殖与分化过程;同时有研究报道,Elk1对细胞的凋亡有一定的调节作用。本课题研究Elkl在雄性小鼠和雌性小鼠性成熟过程中的表达规律,以探究其对精子发生和卵泡发育的作用。同时,在小鼠颗粒细胞中研究过表达Elk1对颗粒细胞增殖凋亡的影响,推测Elk1对卵泡发育、卵泡闭锁的调控机制。实验设计和结果如下:本课题以不同发育时期(周龄)小鼠睾丸和附睾石蜡切片为实验材料,检测Elk1的定位和表达,揭示Elk1在雄性小鼠性成熟过程中的空间和时间表达模式。通过激素(PMSG,HCG)处理不同时间的卵巢,利用免疫组织化学法研究不同发育阶段卵泡中Elk1的表达定位规律,揭示Elk1在卵泡发育中的作用。应用颗粒细胞体外培养模式,检测Elk1在颗粒细胞中的定位模式,以及过表达后对颗粒细胞增殖水平的影响。实验结果说明:(1)Elk1在不同周龄的小鼠睾丸以及附睾中的表达存在差异。western blot结果说明,小鼠性成熟前Elkl在睾丸中的表达较高,并且主要在曲细精管的精原细胞中表达,性成熟后表达量较低,在精子细胞中也有表达;在附睾中的表达随着小鼠周龄的增加呈递增趋势。Elkl的表达与精子的发生、成熟过程有一定的关联,在精原细胞中一直有较高水平定位,暗示其可能在精原细胞的进一步分化和自我维持中发挥作用,而在精子细胞及精子形成过程中表达暗示其可能也在此期间发挥作用。(2)激素处理小鼠卵巢,发现在诱导排卵的过程中,PMSG能降低卵巢中Elkl的表达量,差异不显著(P>0.05);HCG能抑制卵巢中Elk1的表达,并且这一抑制作用时间较短。(3)次级卵泡的初级发育阶段Elkl蛋白表达量较低,有腔卵泡与次级卵泡的表达量较高且差异不显著,但是排卵前卵泡的表达量明显较有腔卵泡的低(P<0.05)。(4)在不同时期颗粒细胞中western blot发现,在卵泡的成熟过程中,Elk1在颗粒细胞中的表达明显增高(P<0.05),但是在排卵前期的颗粒细胞中Elkl的表达受到了抑制。(5)在体外培养的颗粒细胞中发现,过表达Elkl后可以显著促进颗粒细胞的增殖水平(P<0.05)。