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目的:评价抗感染活性成分妥布霉素对成骨细胞的影响,探索注射型抗感染骨的制备方式,并检测其理化性质和生物相容性,验证其治疗感染性骨缺损的有效性。方法:1、妥布霉素对MC3T3-E1细胞的影响:应用含妥布霉素培养液分别培养细胞1d、3d、6d,采用下述方法检测妥布霉素对细胞的影响:应用台盼蓝拒染计数存活细胞数;MTT检测细胞代谢活力;碱性磷酸酶活性检测细胞主要功能;乳酸脱氢酶活性检测膜损伤程度;RT-PCR检测ALP、COLⅠ和Smad1的表达;碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色。同时应用上述方法检测妥布霉素作用3d后,无抗生素培养3d、6d后细胞的恢复情况。2、妥布霉素含量对注射型抗感染骨缓释效果的影响:制备妥布霉素含量分别为25mg/ml、50mg/ml、75mg/ml和100mg/ml的注射型抗感染骨,应用PBS浸泡评价其体外缓释效果、溶胀率和降解率,应用体外细菌吸附试验评价其抗菌能力,应用小鼠肌袋植入实验评价其体内缓释效果。3、注射型抗感染骨的性质:应用倒置法观察壳聚糖水凝胶的凝胶时间,扫描电镜观察注射型抗感染骨三维结构,浸提液法评价其体外细胞毒性,小鼠肌袋植入试验评价其体内生物相容性。4、注射型抗感染骨修复兔感染性骨缺损:应用兔股骨髁感染性骨缺损模型,采用大体观察、X线摄片、药物浓度检测、细菌含量测定、显微CT扫描、荧光双标和组织切片观察,评价其防止感染、修复骨缺损的有效性。结果:1、高浓度的妥布霉素抑制MC3T3-E1细胞的增殖、代谢、碱性磷酸酶活性和功能基因的表达,增加乳酸脱氢酶的释放。去妥布霉素作用后,较低浓度妥布霉素作用的细胞增殖、代谢、碱性磷酸酶活性和功能基因的表达均较较高浓度组高。2、50mg/ml组形态维持较好,缓释效果好,溶胀率、体外细菌吸附试验、局部和外周药物浓度检测方面不低于其他实验组。3、注射型抗感染骨为三维多孔结构,细胞毒性为0~Ⅰ级,体内生物相容性好。4、植入注射型抗感染骨组动物全部存活,体重无明显减低,外周血药浓度低于安全浓度,局部药物4w仍保存52.6%,局部无细菌检出,骨形态学分析及矿化沉积率均显著优于无植入物组,组织学见新骨生成和材料降解相匹配。结论:1、妥布霉素缓释应避免局部过高药物浓度。2、注射型抗感染骨妥布霉素适宜浓度为50mg/ml。3、制备的注射型抗感染骨有较好的理化性质和生物相容性。4、注射型抗感染骨能有效防治感染,并且利于骨缺损修复,是较为理想的防治感染性骨缺损的支架材料。