沙蒿籽内含物与其多糖提纯及ASP-1的结构和抗氧化性的研究

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沙蒿(Artemisia desertorum Spreng. Syst. Veg)属于菊科蒿属的多年生、半灌木状植物,在我国沙漠旱地均有生长,具有重要的环境保护功能和经济利用价值,同时还是重要的中草药资源。从沙蒿籽中提取得到的沙蒿多糖,具有独特的生化结构和活性,目前国内外对沙蒿籽多糖的研究还比较少,本文测定了沙蒿籽中多糖、微量矿物元素和蛋白质的含量,着重对沙蒿籽多糖提取纯化工艺进行了研究,应用响应面法对沙蒿多糖的提取工艺进行了优化,并对提取纯化后的沙蒿籽多糖组分ASP-1进行了结构以及分子量的测定,对其连接方式和单糖组成进行了探讨,与此同时还探索了沙蒿籽多糖的体外抗氧化活性,主要研究结果如下:利用ICP-MS电感耦合等离子体质谱仪和自动凯氏定氮仪分别对沙蒿籽中微量矿物元素和蛋白质的含量进行了测定。结果表明:沙蒿籽中含有丰富的元素,种类达30种之多,其中铁、铜、锌、铬、镍、钒、硒、钴、锰、锶的含量依次降低,为人体的必需元素,沙蒿籽中蛋白质的含量为25.4%。对沙蒿籽采用水提取和醇对比提取多糖的方式,并对沙蒿籽多糖的提取工艺进行了优化分析;结果表明:提取沙蒿籽多糖的最佳前处理条件为料液比为0.20 g/ml,水浴温度79℃,水浴时间45 mmin,在此条件下的沙蒿籽多糖得率为5.82%。沙蒿籽粗多糖经过除杂后,进入DEAE-52纤维素离子交换柱进行分离纯化,可知其经过分离含有四个组分,分别是ASP-1、ASP-2、ASP-3、ASP-4,其中组分ASP-1含量最高。将沙蒿籽多糖组分ASP-1经Sephadex-100葡聚糖凝胶柱的再一次分离纯化得到了沙蒿纯多糖ASP-1,颜色反应确定了该糖的理化性质,结果表明:沙蒿籽多糖组分ASP-1在除杂后,经紫外全波长扫描不含有蛋白质和核酸,ASP-1由蒸馏水洗脱出峰,是中性糖,同时具有均一性,颜色反应说明它可能是不含有酮基团的还原糖。分析了ASP-1的官能团类型及振动方式,确定了其分子量,采用高碘酸氧化法推测了ASP-1的可能分子键型和位置,使用GC技术对多糖中单糖的组成,进行了定性和定量分析。结果表明:经红外光谱扫描可知ASP-1的基本结构特征,其重均分子量为2.406×104g/mol,数均分子量为2.029×104g/mol,粘均分子量为2.05×104g/mol,且粘度系数为0.01357,其分子结构中存在1→6糖苷键或非还原性末端;结构单糖的主要连接键型为1→4或1→6糖苷键连接,可能还存在一些1—2,1→2,6或1→4,6键型。主链主要以1→4糖苷键连接,且有1→6糖苷键存在,ASP-1中以L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-葡萄糖为主,且物质的量之比为0.38:0.38:0.5:0.77:0.81:1。采用对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的清除能力,以及在β-胡萝卜素亚油酸体系中的抗氧化作用,对沙蒿籽多糖ASP-1和沙蒿粗多糖进行了抗氧化能力的分析比较,结果表明:ASP-1和沙蒿粗多糖均表现出一定的抗氧化活性,在浓度为12mg/ml时,ASP-1对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子的清除能力均达到50%以上,在β-胡萝卜素亚油酸体系中的抗氧化能力值,在所测定的抗氧化能力实验中达到40.2%,说明沙蒿多糖组分ASP-1具有抗氧化活性。
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