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目的:研究资木瓜总苷抑制肥大细胞(Mast cell,MC)活化,促进成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡,减轻滑膜炎性增生及关节骨质破坏的抗类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)作用机制。 方法:分离小鼠骨髓细胞诱导分化成骨髓源性肥大细胞mBMMCs,流式细胞术检测细胞表面CD117和 FcεRIα双阳性表达,甲苯胺蓝染色进行鉴定,电镜观察细胞显微结构;CCK-8和MTT法检测不同浓度资木瓜总苷对肥大细胞的毒性;β-己糖胺酶(β-hexosaminidase)法检测mBMMCs活化脱颗粒情况, ELISA法检测细胞上清中类胰蛋白酶(Tryptase)含量;分离小鼠关节成纤维样滑膜细胞培养鉴定,流式细胞术检测FLS细胞膜受体PAR-2的表达,流式细胞术、Western blot法检测FLS细胞的凋亡情况;Pull-down法检测FLS细胞中活化的Rho-GTP酶水平, Western blot法分析活化的Rho-GTP酶中Rho蛋白水平。 结果:(1)资木瓜总苷可显著降低经DNP-BSA,A23187,和SCF体外刺激RBL-2H3和mBMMC肥大细胞β-hexosaminidase的释放率( P<0.01);资木瓜总苷可显著抑制mBMMC类胰蛋白酶的释放(P<0.01);而且资木瓜总苷抑制肥大细胞表面FcεRIα的表达和胞内蛋白Lyn与 PLCγ1的磷酸化。(2)外源性的类胰蛋白酶(Tryptase)显著提高成纤维样滑膜细胞表面PAR-2的表达,显著活化Rho激酶(P<0.05),从而显著抑制CH11诱导的成纤维样滑膜细胞凋亡(P<0.05);而资木瓜总苷对成纤维样滑膜细胞无直接作用。(3)资木瓜总苷处理后的mBMMC上清可降低成纤维样滑膜细胞表面的PAR-2受体的表达,进而抑制活化的Rho表达,显著促进Fas介导的成纤维样滑膜细胞的凋亡(P<0.05);(4)肥大细胞与成纤维样滑膜细胞共培养体系中,资木瓜总苷处理后,可显著抑制活化的Rho表达( P<0.05),显著促进Fas介导的成纤维样滑膜细胞凋亡(P<0.05),而加入PAR-2阻断剂后这种作用显著减弱。 结论:(1)资木瓜总苷可显著抑制经抗原刺激的肥大细胞活化脱颗粒;资木瓜总苷抑制肥大细胞的活化机制可能会通过FcεRIα-Lyn-PLCγ1通路实现。(2)肥大细胞来源的类胰蛋白酶可作用于成纤维样滑膜细胞表面PAR-2受体进而活化Rho激酶,抑制Fas介导的成纤维样滑膜细胞凋亡;(3)资木瓜总苷可抑制肥大细胞释放的类胰蛋白酶,进而阻断Tryptase-PAR-2-Rho-FLS信号自身放大系统途径,促进FLS的凋亡。