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目的:邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)是一种典型的环境内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals,EDCs),常在各种塑料化合物中用作增塑剂,包括婴儿玩具,医疗器械等。流行病学研究表明,DEHP的暴露会增加中枢神经系统疾病的发生风险。作为中枢神经系统内数量众多、分布广泛的神经细胞,星形胶质细胞(Astocyte,AS)可分泌多种神经营养因子,在脑内对神经细胞的存活和生长等方面起着重要作用。其中,胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophiefactor,GDNF)是一种由AS分泌的在神经元存活和生长中发挥主要作用的神经营养因子,其分泌障碍会引发相关神经系统疾病的发生。但目前关于DEHP暴露是否对AS神经营养因子分泌造成影响尚无报道。本研究拟通过体内外实验探讨DEHP暴露对AS中GDNF分泌的影响。实验方法:1、将Wistar孕鼠随机分为四个剂量组:0、30、300和750 mg/kg/day组,每组以相应剂量的DEHP玉米油溶液进行灌胃给药。取仔鼠大脑皮质进行western blot和免疫荧光染色实验检测神经营养因子GDNF以及相关蛋白和通路蛋白的表达。2、取新生Wistar大鼠大脑皮质提取原代AS进行培养,采用CCK8检测MEHP暴露后AS的耐受情况,选取后续实验所需合适浓度。双荧光素酶检测MEHP对雌激素受体特异性结合的影响,western blot法检测外源性雌激素对GDNF、p300蛋白的影响;采用western blot和免疫荧光染色检测GDNF和相关通路蛋白的表达;并通过使用ERK/c-fos信号通路的激活剂Honokiol以及抑制剂U0126后检测信号通路相关蛋白的变化情况。结果:1、通过western blot实验发现,与0和30mg/kg/day剂量组相比,300和750mg/kg/day剂量组雄性仔鼠大脑皮质的GDNF、p-ERK1/2、c-fos和p300的蛋白水平显著下降(Р<0.05)。而雌性仔鼠蛋白水平没有明显改变(P>0.05)。对仔鼠大脑内侧前额叶皮质Ⅱ/Ⅲ层区域进行免疫荧光染色,结果与western blot结果相似,300和750mg/kg/day剂量组雄性仔鼠大脑内侧前额叶皮质Ⅱ/Ⅲ层的p-ERK和c-fos蛋白表达水平与对照组相比降低。而雌性仔鼠无明显变化。2、通过western blot实验检测,在原代培养的AS中,100μM和300μM的MEHP染毒组GDNF、p-ERK1/2、c-fos和p300蛋白水平较对照组明显下降(P<0.05),ERα的蛋白表达与对照组相比无显著差异(P>0.05);与MEHP单独处理组相比,在体外雌激素与MEHP共同作用的AS中,p300和GDNF均有上调,差异有统计学意义(P<0.05);采用双荧光素酶方法检测发现,与单纯MEHP暴露组相比,体外雌激素与MEHP共同作用于细胞时荧光素酶的活性有所升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,与MEHP单独处理组相比,Honokiol与MEHP共同处理组中p-ERK1/2,c-fos,GDNF蛋白水平显著增加(P<0.05);与对照组相比,单纯MEHP处理组和MEHP与U0126共同处理组的p-ERK1/2、c-fos和GDNF蛋白水平较对照组显著下降,差异具统计学意义(P<0.05)。结论:1、母体DEHP暴露导致雄性仔鼠大脑皮质AS分泌的神经营养因子GDNF减少。2、DEHP暴露可通过抑制ERK/c-fos信号通路致使AS分泌GDNF减少。3、DEHP暴露可能通过干扰脑内正常雌激素作用途径而影响AS分泌功能。