【摘 要】
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该研究室在成功地将hBMP-3成熟肽基因转入烟草并检测有目的蛋白表达的基础上,进行hBMP-3成熟肽基因转化番茄和hBMP-3全长基因转化烟草的研究,以期获得转hBMP-3成熟肽基因番茄
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该研究室在成功地将hBMP-3成熟肽基因转入烟草并检测有目的蛋白表达的基础上,进行hBMP-3成熟肽基因转化番茄和hBMP-3全长基因转化烟草的研究,以期获得转hBMP-3成熟肽基因番茄和转hBMP-3全长基因烟草植株,为进一步研究hBMP-3成熟肽基因和全长基因在植物体内的表达及区别奠定基础.该试验是在已经构建好的植物表达载体pCAMBIA1300-hBMP-3m和pCAMBIA1301-hBMP-3载体的基础上,建立番茄子叶的高频率再生体系和番茄子叶的高频遗传转化系统,利用根癌农杆菌介导的方法,将人骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因和人骨形成蛋白-3(hBMP-3)全长基因分别导入番茄和烟草,并对转基因植株进行了检测.通过以上研究所得结果如下:1.将含有目的基因的质粒pCAMBIA1300-hBMP-3m和pCAMBIA1301-hBMP-3通过电激法导入根癌农杆菌LBA4404;2.根据番茄子叶外植体在加有不同激素浓度配比的培养基上愈伤组织分化和芽再生的情况,确定最佳分化培养基为MS<,0>+2.0mg/L BA+0.2mg/L IAA;3.经潮霉素梯度筛选试验,最终确定番茄的适宜筛选浓度为20mg/L,烟草的适宜筛选浓度为35mg/L;4.建立子以番茄子叶为外植体的遗传转化体系,确定了预培养时间、浸菌时间及共培养时间等转化条件,建立了番茄高频转化系统,然后通过农杆菌介导法将hBMP-3m基因导入番茄,并且获得了Hyg抗性植株.通过PCR检测证实部分番茄抗性植株中已导入hBMP-3m基因;5.通过农杆菌介导法将hBMP-3全长基因导入烟草,并且获得了Hyg抗性植株,通过GUS基因瞬时表达检测、转化植株的生长情况及形态学分析、Hyg抗性鉴定及PCR检测,证明目的基因已经整合到烟草基因组中.
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