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本研究选择胎儿成纤维细胞作为供体细胞，通过化学辅助手工去核的途径构建猪的核移植重构胚。尝试建立适合本实验室猪的手工核移植体系，为今后建立高效的手工克隆猪体细胞核移植研究打下基础。实验主要结果如下： 1.本研究利用猪耳组织块培养法接种,培养3～4d，可见细胞沿着组织块边缘向外爬出，6d左右即可明显观察到细胞沿着组织块的周围长出，呈典型成纤维状。用30％FBS+10%DMSO+60%DMEM冻存细胞，经过细胞复苏后4～6h可见细胞贴壁，细胞存活率达90%以上。通过消化处理后，可以获得猪胎儿成纤维细胞。这样为以后的核移植研究提供了供核细胞。 2.脱羰秋水仙碱诱导猪卵母细胞显核。通过比较在不同的时间和不同的Deme浓度对猪卵母细胞显核的影响。结果显示：①添加不同浓度的DC处理卵母细胞1 h，各组去核率经统计分析差异不显著，而以0.4μg/mL的浓度组显核率最高，达到80.8%，②0.4μg/mL DC诱导猪卵母细胞显核，处理30，40,50，60min时获得的显核率较高（75.5%；75.0%；74.5%；72.8%），各组去核率差异不显著。 3.研究了在不同电场强度、电脉冲次数和电场时程三个条件下对猪去核卵母细胞融合的影响。结果表明：①在电场时程30μs，1 DC时，电场强度0.8kv/cm的条件下卵母细胞的融合率（94.7%）较其他各组高；当场强继续增大时，融合率下降（88.6%，87.7%，84.3%）。②在电场强度为0.8kv/cm，1次直流脉冲的条件下，脉冲时程初始为30μs时，卵母细胞融合率为94.7%；当脉冲时程达到60μs和90μs时，融合率分别是86.5%和83.8%；卵母细胞的融合率有明显地下降。③在电场强度为0.8kv/cm，电场时程为30μs的条件下，1次电脉冲激活卵母细胞的融合率（94.7%）和2次电脉冲的融合率（95.6%）无显著差异（94.7%，95.6%,P﹥0.05），但两者显著高于3次电脉冲的融合率（81.7%）。 4.通过以传统和手工两种方法对猪卵母细胞进行核移植研究。结果显示：手工去核后进行核移植得到的无透明带重构胚的分裂率（53.1%）与显微挤压去核方法获得的重构胚的分裂率（55%）无显著差异。