茶树组织培养再生体系优化与遗传转化的研究

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茶(Camellia sinensis L.)为山茶科山茶属多年生常绿乔木或灌木,具有悠久的栽培历史,是我国重要的经济作物之一。常规茶树育种技术具有局限性,如远缘杂交困难、有益突变频率低、选育优良品种耗时长、花期不遇等,制约了茶树优质资源的利用,使得茶树品种选育工作难以取得突破性的进展。本研究以茶树未成熟胚为对象,优化了茶树组织培养再生体系,并在此基础上探索根癌农杆菌介导茶树遗传转化技术,为利用基因工程技术对茶树进行遗传改良打下基础。主要研究结果如下:1.茶树植株组培再生体系优化本论文以茶树未成熟胚为外植体进行组织培养,对各阶段影响再生效率的诸因素进行研究,选出了各阶段适宜外植体生长的最佳培养基和激素组合,优化了茶树组织培养再生体系。研究结果表明,未成熟胚以胚向上的方式接种,诱导效果较好;当诱导培养基为ER+O.1mg/L NAA+1mg/L6-BA+1mg/L GA3时,茶树愈伤组织诱导率最高,为98.9%;分化培养基为ER+0.1mg/L IBA+2mg/L6-BA时,分化率最高可达87.5%;组培苗在壮苗培养基ER+0.1mg/L NAA+2mg/L6-BA+1mg/L GA3中长势最好;最佳的生根培养基为1/2MS+0.2mg/L IBA+1mg/LKT.2.农杆菌介导茶树遗传转化体系建立以带未成熟胚的子叶和纯子叶为转化受体进行遗传转化体系研究,探讨了遗传转化过程中侵染时间、共培养时间、共培养基、AS浓度和延后选择培养对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌浸染15min,共培养3d,附加150μmol/L AS的YEB共培养基,延后选择培养3d均可提高转化效率。另外,带未成熟胚的子叶的转化率较高,更适合作为茶树遗传转化的转化受体。在上述优化的遗传转化技术参数下培养,获得了完整的再生抗性植株。
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