【摘 要】
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目的 研究铜绿假单胞菌经亚胺培南和头孢他啶诱导后,其浮游菌和生物膜对β-内酰胺酶表达能力的影响。 方法 用铜绿假单胞菌PAO1在eppcndorf管内建立生物膜,通过结晶紫快速
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目的 研究铜绿假单胞菌经亚胺培南和头孢他啶诱导后,其浮游菌和生物膜对β-内酰胺酶表达能力的影响。 方法 用铜绿假单胞菌PAO1在eppcndorf管内建立生物膜,通过结晶紫快速染色法证实生物膜的形成,使用光学显微镜观察生物膜的结构。分别用不同浓度的亚胺培南和头孢他啶诱导生物膜铜绿假单胞菌和浮游菌4小时;反复冻融法提取酶粗提取液;使用产色头孢菌素(头孢硝噻吩)检测酶粗提取液中β-内酰胺酶的表达,用分光光度仪测定β-内酰胺酶的活性。用福林酚法(Folin-Phenol)测定蛋白含量,对β-内酰胺酶进行定量分析。采用改良的头孢西丁三维实验鉴定β-内酰胺酶的类型。 结果 在没有诱导剂作用的情况下,生物膜铜绿假单胞菌和浮游菌均未检测到β-内酰胺酶的活性,但在一定浓度的亚胺培南和头孢他啶诱导下,生物膜铜绿假单胞菌和浮游菌中都有明显的β-内酰胺酶的表达。浮游菌在2mg/L(1/2 MIC)浓度的亚胺培南时产生β-内酰胺酶的活性最强,而生物膜在16mg/L(4 MIC)时最强。两者β-内酰胺酶活性最大值比较,其差别存在统计学意义(P<0.05)。头孢他啶浓度在低于2mg/L(1/2 MIC)时,未检测到β-内酰胺酶的表达,而亚胺培南在0.2mg/L(1/10 MIC)时,仍然可检测到明显的β-内酰胺酶活性。比较两者β-内酰胺酶活性的最大值,其差别也存在统计学意义(P<0.05)。改良头孢西丁三维实验证实铜绿假单胞菌经诱导产生的β-内酰胺酶主要为AmpC酶。 结论 生物膜铜绿假单胞菌比浮游菌更容易被诱导产生β-内酰胺酶;亚胺培南是AmpC酶的强诱导剂,其诱导能力强于头孢他啶。
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