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D-半胱氨酸是一种重要的医药中间体,在医药、食品等领域有着广泛的用途。由于D-半胱氨酸在医药领域具有不可替代的作用,使其价格远高于L-半胱氨酸和DL-半胱氨酸。探索一种能够有效拆分DL-半胱氨酸来获得D-半胱氨酸的方法,具有广阔的应用前景和工业价值。
本实验室从天然环境中筛选出一株恶臭假单胞菌TSl138,该菌能够利用工业废料DL-ATC生产L-半胱氨酸,但是由于其含有的L-半胱氨酸脱巯基酶能够分解L-半胱氨酸,使得L-半胱氨酸的积累受到了影响。
本研究以L-半胱氨酸脱巯基酶为研究对象,从拆分DL-半胱氨酸的角度出发,首先,对构建的具备表达L-半胱氨酸脱巯基酶的基因工程菌株E.coli BL21(DE3)-pET2 la(+)-CD进行了诱导表达,并优化了其表达条件,确立了最佳菌体密度为A600=0.5、IPTG诱导浓度为20 mg/L、诱导时间为2h,在最佳条件下,酶活力为126.5 U/g;随后,对该酶拆分DL-半胱氨酸的条件进行了优化,确立了最佳条件,分别为:反应pH值为8.8、反应温度为45℃、底物浓度为6g/L、酶源细胞浓度为13g/L、反应时间为1h。在最适条件下进行了DL-半胱氨酸的拆分反应,将得到的D-半胱氨酸氧化为D-胱氨酸后进行分离纯化;最后对得到的产品进行了鉴定,各项检测指标均合格,纯度为95.1%。
本研究为D-半胱氨酸和D-胱氨酸的生产提供了一条新的绿色生产途径,并具备一定的产业化前景。