心肌肥大是一种机械负荷代偿反应,在长期的压力过载、高血压、瓣膜病等病理条件刺激下,最终会发展成为心力衰竭甚至导致死亡。因此,深入研究心肌肥大发生的分子机制,对于开发新的靶向药物、治疗及预防心肌肥大和保护人们的健康有着重要的理论和实际意义。NHH1是一类新的b HLH转录因子,实验室前期结果证明:NHH1在多种组织中表达,且在心脏组织中的表达水平较高;RNA干扰在斑马鱼中敲低NHH1表达导致心室和心房发育畸形;在心脏肥大患者标本和PE诱导的初生大鼠心室肌细胞（NRVCs）中NHH1转录水平和蛋白水平下调;NHH1稳定过表达系中ANF启动子的转录活性受到抑制;细胞免疫共定位分析表明NHH1与β-catenin在细胞中存在共定位关系。上述研究结果提示NHH1有可能通过Wnt/β-catenin信号调控心肌肥大的发生,但是其具体机制尚不清楚。因此,本文对此进行了较深入的研究。首先,本文通过ISO构建NHH1转基因小鼠（NHH1 TG小鼠组）和WT小鼠（ISO诱导组）的心肌肥大模型。分析HE染色、心重/体重比、心重/胫骨长比、WGA染色以及RT-q PCR和western-bolt分析心肌肥大标记因子ANF,NHH1 TG小鼠组对比ISO诱导组可以显著抵抗ISO诱导的心肌肥大。随后,本文对NHH1与经典Wnt信号之间的关系进行了验证,通过经典Wnt/β-catenin信号特异的TOPFlash荧光素酶报告系统分析和在多个细胞系中过表达NHH1后检测经典Wnt信号成员β-catenin蛋白表达,发现NHH1能够抑制TOPFlash活性及负调节β-catenin蛋白表达。GEO数据挖掘分析发现,在293T细胞系中突变β-catenin S37A磷酸化位点和在TCF1敲除的小鼠胰岛细胞中,NHH1表达显著下降。这些结果提示经典Wnt信号被抑制后可能与NHH1形成反馈回路,降低NHH1的表达。进一步通过Co-IP实验发现NHH1与β-catenin存在相互作用,GST-pulldown实验证明了NHH1与β-catenin的相互作用为直接结合。结构域分析结果表明b HLH和248-588aa结构域对TOPFlash荧光素酶活性都没有抑制作用,只有DUF654结构域能抑制TOPFlash的荧光素酶活性。先前研究发现LEF1能够直接结合在ANF启动子区域,那么NHH1能否结合在ANF启动子上呢?双荧光素报告系统分析结果显示NHH1能够抑制ANF启动子驱动的荧光素酶活性。进一步通过生物信息学分析ANF编码区起始密码子ATG上游3000 bp的启动子区域,预测得到3个保守的motif,通过Ch IP分析的结果初步显示NHH1能够与这些motif结合。在PE诱导的NRVCs心肌肥大模型中,β-catenin蛋白水平显著上升,提示在心肌肥大过程中Wnt信号被重激活,在ISO诱导的小鼠心肌肥大模型中,NHH1 TG鼠的β-catenin蛋白水平和m RNA水平显著下调,经典Wnt信号成员TCF4 m RNA的表达也显著降低,表明在小鼠中NHH1的转基因过表达确实减弱了ISO诱导的心肌肥大且可能通过抑制Wnt信号通路来实现的。总之,本文研究表明NHH1 TG小鼠抵御ISO诱导心肌肥大的分子机制可能是通过抑制经典Wnt信号通路实现的。而且,NHH1与经典Wnt信号通路关系密切,与β-catenin存在直接的相互作用,为进一步揭示NHH1的生物学功能奠定了良好的基础。