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海洋微生物是海洋生物的重要组成部分,它们不仅种类繁多,而且生存环境独特,因此能够产生结构新颖、功能特殊的次生代谢产物。海洋微生物的次生代谢产物作为新的医药资源正受到广泛的关注,将成为21世纪研究的热点。海洋微生物研究的难题之一是海洋微生物的鉴定,尤其是一些海洋真菌脱离原生境后,不再产生有性繁殖结构,无法用传统方法进行鉴定,因此在海洋真菌鉴定中引入分子分类鉴定方法就显得尤为重要。
本文对黄海海洋微生物及其次生代谢产物进行了初步研究,发现包括海洋细菌、放线菌及真菌在内的海洋微生物能够产生具有显著的抗人类病源菌活性的次生代谢产物。本文还就海洋微生物申海洋真菌鉴定难的问题进行了方法学方面的探索,采用分子指纹法和形态学观察相结合,可以对真菌进行快速检索分类,节省时间和人力。对于一些在现有条件下无法获得产孢结构的真菌也可以进行分类,然后结合形态学特征确定其种属。
本文通过对两种黄海鱼类白姑鱼(Argyrosomusargentatus)、带鱼(Trichiurushaumela)及一种软体动物缢蛏(Sinonovaculaconstricta)的体表及体内微生物的分离、培养,获得真菌27株、放线菌11株、细菌109株,其中85%的微生物是在使用人工海水的培养基上获得的。在细菌中,革兰氏阳性菌占了68%。微生物拮抗实验表明,12株细菌,8株放线菌和13株真菌对一种或多种人类病源菌具有抑菌活性。进一步研究表明,5株细菌,5株放线菌以及17株真菌的发酵液的乙酸乙酯提取物具有抑制人类病原菌的活性。对其中一株活性较强且抗菌谱较广的真菌Z16进行了大规模的发酵,该发酵液的乙酸乙酯部位不仅对人类病源真菌及细菌具有抗性,并且还能导致实验人员皮肤过敏。利用硅胶、SependexLH-20,ODS柱层析以及HPLC,共分离得到化合物8个,鉴定了6个化合物的结构,其中1个(6)为新化合物,化合物1,2,3均为单端孢霉烯类化合物,对枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis),白色念珠菌(Candidaalbicans),黑曲霉(Aspergillusniger),红发毛癣菌(Trichophytonrubrum)具有显著的生长抑制作用,应该是该菌发酵液乙酸乙酯粗提物具有较强的抗菌活性的物质基础,同时也可能该粗提物导致皮肤过敏的原因所在。
本文采用DNA指纹法和传统形态学观察相结合,确定分离自白姑鱼精巢的活性菌株Z16为黑粘座孢霉属真菌,并鉴定另一株不产生繁殖结构,因而无法用传统的形态学方法进行鉴定的海洋真菌YS4108为Keissleriellasp.属真菌。