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背景:
子宫内膜癌(Endometrial carcinoma，EC)常在围绝经期及绝经后发病，是女性生殖系统中最为常见的恶性肿瘤，近二十年其发病率在持续增长并且呈现出了年轻化的发展态势。目前认为子宫内膜癌可分为Ⅰ型(雌激素依赖性)及Ⅱ型(非雌激素依赖性)，Ⅰ型通常预后良好，Ⅱ型复发和转移性风险高，预后差。尽管子宫内膜癌的总体生存率及预后较好，但是存在转移或复发的晚期病人预后仍差，需要更有效的靶向治疗。但目前对于子宫内膜癌的研究仍不够深入，其发病机制及治疗靶点仍需不断探索。microRNA(miRNA)近年来作为一种新型的肿瘤治疗靶点被广泛研究。miRNA是一种短链的非编码RNA，主要通过与靶mRNA的3UTR区结合，影响mRNA的稳定性和翻译，多项证据显示，miRNA在肿瘤进展中起到关键的调控作用，可在多种恶性肿瘤中充当促癌基因。但截至目前子宫内膜癌中miR1290如何表达尚无报道。通过软件预测出miR1290的靶基因是NLRC3。NLRC3(NOD3)是NLR家族中较新、研究较少的一员，可作为结肠癌中的抑癌分子。目前NLRC3在子宫内膜癌中的表达暂无报道。
目的:
1.探究miR1290在子宫内膜癌组织、癌旁组织及正常子宫内膜组织中的表达情况及miR1290与病理分级的关系。2.探究miR1290慢病毒降低miR1290表达对子宫内膜癌细胞系体外生长增殖、侵袭迁移及上皮-间质转化能力的影响。3.探究敲低miR1290对子宫内膜癌分子信号通路的影响。4.探究敲低miR1290对子宫内膜癌细胞系在裸鼠体内增殖能力的影响。5.探讨miR1290可能的下游分子NLRC3。
结果:
1.共获得子宫内膜样腺癌37例(其中含有配对癌旁组织标本10例)，正常子宫内膜组织23例。利用RT-PCR技术检测各个标本的miR1290表达。结果示癌灶组织中的miR1290表达为癌旁组织的1.75倍，为正常组织的1.5倍(P＜0.05);miR1290在分泌期子宫内膜组织中的表达为增生期的1.7倍(P＜0.01)，而miR1290在子宫内膜癌中-低分化组中的表达为高分化组的1.3倍，但差异未见统计学意义(P＞0.05)。2.根据实验1的结论，使用慢病毒miR1290inhibitor对KLE、ISHIKAWA两种细胞系进行转染，构建稳定的miR1290低表达细胞系，并验证敲低效率。成功建立miR1290低表达细胞系后，利用CCK8实验、克隆形成实验、划痕愈伤实验、Transwell侵袭、迁移实验及WesternBlot实验验证细胞体外生长增殖、侵袭迁移及EMT能力的改变。结果显示，在KLE细胞系中，克隆形成实验和CCK8实验均证实敲低miR1290促进细胞增殖能力(P＜0.05)，ISHIKAWA细胞系也显示出相同的结果(P＜0.05);在划痕愈伤实验中，敲低miR1290显著抑制了细胞划痕的愈合(P＜0.05)，在Transwell迁移及侵袭实验中，miR1290的表达降低减少了穿膜的细胞数(P＜0.05)，表示KLE及ISHIKAWA细胞的迁移及侵袭能力减弱;用Westernblot实验比较miR1290低表达肿瘤细胞及正常肿瘤细胞中EMT指标的变化，结果显示具有保护作用的E-钙粘蛋白在miR1290低表达的KLE及ISHIKAWA细胞中表达升高，而N-钙粘蛋白、波形蛋白Snail和Slug蛋白在miR1290低表达的KLE及ISHIKAWA细胞中表达降低，说明miR1290的降低可抑制子宫内膜癌细胞的上皮-间质转化。3.在KLE细胞中降低miR1290表达可导致PI3K、PAKT/AKT的表达降低(P＜0.05)。在ISHIKAWA细胞中敲低miR1290可导致Wnt及β-catenin的表达降低(P＜0.05)。表明miR1290在KLE细胞中可能通过PI3K/AKT通路来发挥作用，而在ISHIKAWA细胞中可能通过Wnt/β-catenin通路发挥作用。4.将miR1290低表达稳转KLE细胞及对照组注射入9只裸鼠的皮下，于接种后第28天完整剥除肿瘤，对剥除的肿瘤进行称重，结果示miR1290敲除组肿瘤重量高于对照组(P＜0.05)。肿瘤标本行RT-PCR检测miR1290的表达，结果示miR1290敲除组的miR1290表达降低(P＜0.05)。5.通过TargetScanHuman软件，预测出NLRC3是miR1290的靶基因。24例癌灶与10例正常子宫内膜的Westernblot结果显示，子宫内膜癌中NLRC3的表达为正常子宫组织的0.6倍。miR1290的表达和NLRC3的表达呈负相关，相关系数r2=0.0811，表明miR1290与NLRC3相关性差。并且在KLE及ISHIKAWA细胞系中，miR1290敲低组和对照组中的NLRC3表达无差异。
结论:
1.miR1290在子宫内膜癌中的表达较癌旁组织及正常内膜组织显著升高，且在正常子宫内膜分泌期的表达高于增生期，在子宫内膜癌中中-低分化组的表达高于高分化组。2.降低miR1290的表达在体内及体外均促进子宫内膜癌细胞增殖，但在体外可以明显的抑制细胞的侵袭迁移能力及上皮-间质转化能力。3.miR1290可能是通过PI3K/AKT通路及Wnt/β-catenin通路来发挥作用。4.NLRC3在子宫内膜癌癌灶中的表达较正常内膜组织显著降低，但改变miR1290的表达并未对NLRC3的表达造成影响，提示miR1290可能通过其他靶点发挥促进肿瘤进展作用。
子宫内膜癌(Endometrial carcinoma，EC)常在围绝经期及绝经后发病，是女性生殖系统中最为常见的恶性肿瘤，近二十年其发病率在持续增长并且呈现出了年轻化的发展态势。目前认为子宫内膜癌可分为Ⅰ型(雌激素依赖性)及Ⅱ型(非雌激素依赖性)，Ⅰ型通常预后良好，Ⅱ型复发和转移性风险高，预后差。尽管子宫内膜癌的总体生存率及预后较好，但是存在转移或复发的晚期病人预后仍差，需要更有效的靶向治疗。但目前对于子宫内膜癌的研究仍不够深入，其发病机制及治疗靶点仍需不断探索。microRNA(miRNA)近年来作为一种新型的肿瘤治疗靶点被广泛研究。miRNA是一种短链的非编码RNA，主要通过与靶mRNA的3UTR区结合，影响mRNA的稳定性和翻译，多项证据显示，miRNA在肿瘤进展中起到关键的调控作用，可在多种恶性肿瘤中充当促癌基因。但截至目前子宫内膜癌中miR1290如何表达尚无报道。通过软件预测出miR1290的靶基因是NLRC3。NLRC3(NOD3)是NLR家族中较新、研究较少的一员，可作为结肠癌中的抑癌分子。目前NLRC3在子宫内膜癌中的表达暂无报道。
目的:
1.探究miR1290在子宫内膜癌组织、癌旁组织及正常子宫内膜组织中的表达情况及miR1290与病理分级的关系。2.探究miR1290慢病毒降低miR1290表达对子宫内膜癌细胞系体外生长增殖、侵袭迁移及上皮-间质转化能力的影响。3.探究敲低miR1290对子宫内膜癌分子信号通路的影响。4.探究敲低miR1290对子宫内膜癌细胞系在裸鼠体内增殖能力的影响。5.探讨miR1290可能的下游分子NLRC3。
结果:
1.共获得子宫内膜样腺癌37例(其中含有配对癌旁组织标本10例)，正常子宫内膜组织23例。利用RT-PCR技术检测各个标本的miR1290表达。结果示癌灶组织中的miR1290表达为癌旁组织的1.75倍，为正常组织的1.5倍(P＜0.05);miR1290在分泌期子宫内膜组织中的表达为增生期的1.7倍(P＜0.01)，而miR1290在子宫内膜癌中-低分化组中的表达为高分化组的1.3倍，但差异未见统计学意义(P＞0.05)。2.根据实验1的结论，使用慢病毒miR1290inhibitor对KLE、ISHIKAWA两种细胞系进行转染，构建稳定的miR1290低表达细胞系，并验证敲低效率。成功建立miR1290低表达细胞系后，利用CCK8实验、克隆形成实验、划痕愈伤实验、Transwell侵袭、迁移实验及WesternBlot实验验证细胞体外生长增殖、侵袭迁移及EMT能力的改变。结果显示，在KLE细胞系中，克隆形成实验和CCK8实验均证实敲低miR1290促进细胞增殖能力(P＜0.05)，ISHIKAWA细胞系也显示出相同的结果(P＜0.05);在划痕愈伤实验中，敲低miR1290显著抑制了细胞划痕的愈合(P＜0.05)，在Transwell迁移及侵袭实验中，miR1290的表达降低减少了穿膜的细胞数(P＜0.05)，表示KLE及ISHIKAWA细胞的迁移及侵袭能力减弱;用Westernblot实验比较miR1290低表达肿瘤细胞及正常肿瘤细胞中EMT指标的变化，结果显示具有保护作用的E-钙粘蛋白在miR1290低表达的KLE及ISHIKAWA细胞中表达升高，而N-钙粘蛋白、波形蛋白Snail和Slug蛋白在miR1290低表达的KLE及ISHIKAWA细胞中表达降低，说明miR1290的降低可抑制子宫内膜癌细胞的上皮-间质转化。3.在KLE细胞中降低miR1290表达可导致PI3K、PAKT/AKT的表达降低(P＜0.05)。在ISHIKAWA细胞中敲低miR1290可导致Wnt及β-catenin的表达降低(P＜0.05)。表明miR1290在KLE细胞中可能通过PI3K/AKT通路来发挥作用，而在ISHIKAWA细胞中可能通过Wnt/β-catenin通路发挥作用。4.将miR1290低表达稳转KLE细胞及对照组注射入9只裸鼠的皮下，于接种后第28天完整剥除肿瘤，对剥除的肿瘤进行称重，结果示miR1290敲除组肿瘤重量高于对照组(P＜0.05)。肿瘤标本行RT-PCR检测miR1290的表达，结果示miR1290敲除组的miR1290表达降低(P＜0.05)。5.通过TargetScanHuman软件，预测出NLRC3是miR1290的靶基因。24例癌灶与10例正常子宫内膜的Westernblot结果显示，子宫内膜癌中NLRC3的表达为正常子宫组织的0.6倍。miR1290的表达和NLRC3的表达呈负相关，相关系数r2=0.0811，表明miR1290与NLRC3相关性差。并且在KLE及ISHIKAWA细胞系中，miR1290敲低组和对照组中的NLRC3表达无差异。
结论:
1.miR1290在子宫内膜癌中的表达较癌旁组织及正常内膜组织显著升高，且在正常子宫内膜分泌期的表达高于增生期，在子宫内膜癌中中-低分化组的表达高于高分化组。2.降低miR1290的表达在体内及体外均促进子宫内膜癌细胞增殖，但在体外可以明显的抑制细胞的侵袭迁移能力及上皮-间质转化能力。3.miR1290可能是通过PI3K/AKT通路及Wnt/β-catenin通路来发挥作用。4.NLRC3在子宫内膜癌癌灶中的表达较正常内膜组织显著降低，但改变miR1290的表达并未对NLRC3的表达造成影响，提示miR1290可能通过其他靶点发挥促进肿瘤进展作用。