在根瘤菌的群体感应系统中，调控蛋白是通过与信号分子相互作用的模式来行使其群体效应功能的。在各种根瘤菌中广泛存在LuxR/I类群体感应系统，并且种类繁多，目前已发现的包括CinR/I，RaiR/I，RhiR/I，TraR/I，SinR/I等，分别调节根瘤菌的不同生理功能。本实验室在中慢生型天山根瘤菌中首次发现了MrtR/I系统，其中mrtI基因负责合成AHLs分子，而且只有在具有很高AHLs活性的野生型菌株的上清存在的情况下mrtI基因才能够被诱导表达，研究还发现mrtR基因的缺失会影响AHLs分子的产生，因此我们推测MrtR蛋白通过调控mrtI基因从而影响AHLs分子的产生。采用PCR技术从含有mrtR/I的质粒pHMZ981中扩增mrtR基因片段，凝胶电泳结果显示，扩增出850bp左右的目的条带，与预期结果相符。将PCR产物经BamHI和EcoRI酶切、纯化、回收后，插入原核表达载体pALEx中，重组表达载体命名为pDJ1，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株的感受态细胞，重组菌命名为BL21（DE3）（pDJ1）。原核表达重组菌BL21（DE3）（pDJ1）经IPTG诱导及表达条件的优化后，SDS-PAGE结果表明，GST-MrtR融合蛋白成功得到了表达。将其表达产物经超声波裂解，高速离心分离上清和沉淀，SDS-PAGE分析结果显示，BL21（DE3）（pDJ1）表达产物GST-MrtR同时以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在。过柱纯化GST-MrtR，纯化产物浓度达1mg/ml以上。将纯化好的GST-MrtR与等量弗氏完全佐剂乳化，注射8周龄的Balb/c鼠，50μg/只，以后每隔2周用等量弗氏不完全佐剂乳化，加强免疫2次，剂量同首免，第3次免疫后10天采血，分离血清，采用间接ELISA法检测所得到的抗体效价达到1：262000。用制备的GST-MrtR多克隆抗体对融合蛋白及非融合表达的MrtR蛋白进行Western blot分析，均呈现特异性的结合条带，表明所制备的抗体具有较好的抗体活性，可与免疫原特异性结合。设计引物将mrtI前端启动子序列约500bp克隆到pBSK载体上，双酶切之后与纯化的GST-MrtR蛋白做Gel-shift实验，经反复验证条带没有发生迁移，由此推断MrtR蛋白的作用位点并不在mrtI的前端，或者他们之间的作用还受到一些其他因子的调节。