基于同轴微流体系统制备水凝胶微管用于舌鳞癌细胞迁移行为研究

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舌鳞状细胞癌是最常见的头颈部恶性肿瘤,因舌部具有丰富的血供和淋巴回流以及显著的运动特性,舌鳞状细胞癌具有极大的侵袭性和高转移率,晚期舌癌的5年生存率不足50%。非甾体类抗炎药是一类种类繁多的止痛、退热和预防心血管疾病的常见药物。研究发现,非甾体抗炎药具有抑制环氧合酶活性,减少前列腺素合成,从而抑制肿瘤细胞迁移的作用。目的:为了筛选具有抗舌鳞癌细胞体外迁移作用的非甾体类抗炎药物,需要构建全新的三维动态体外迁移模型,以弥补传统静态二维细胞培养的缺陷,通过体外药物筛选模型的成功构建以及优异的抗迁移药物筛选作用,为临床前实验提供理论基础。方法:1.设计同轴微量注射装置,制备中空海藻酸钙水凝胶微管,探究制备参数(内、外向液体流速)对微管结构的影响,选择最佳制备参数制备中空微管,利用光学显微镜、扫描电子显微镜(SEM)以及激光共聚焦显微镜(CLSM)对微管结构进行表征,装置改良,引入垂直向含舌鳞癌细胞(CAL-27)悬液,选择最佳制备参数,利用荧光显微镜和CLSM对细胞微管进行表征。2.添加天然细胞外基质成分(纤维蛋白)对海藻酸钙水凝胶进行生物改性,体外培养72 h,观察细胞状态与增殖情况,Calcein-AM/PI活/死细胞染色及细胞骨架染色验证水凝胶良好的生物相容性和细胞形态变化。3.选择三种非甾体类抗炎药(阿司匹林、吲哚美辛、尼美舒利),CCK-8实验验证药物的细胞毒性作用,筛选合适药物浓度,分别利用划痕实验和细胞微管实验评价三种非甾体抗炎药对CAL-27细胞迁移运动的影响。结果:1.测量不同参数下制备的微管的内外径和管壁厚度,结果显示制备参数与微管结构存在线性关系,形貌表征证明了微管的中空结构,微管管壁内封装CAL-27细胞,调整制备参数,实现了细胞聚集有序化排列。2.体外培养细胞状态观察、活/死细胞染色以及细胞骨架染色结果证明添加天然细胞外基质成分(纤维蛋白)显著提高海藻酸钙水凝胶的生物活性,细胞呈圆形,生长状态良好,证明细胞三维培养模型成功建立。3.细胞毒性实验结果显示,三种非甾体类抗炎药(阿司匹林、吲哚美辛、尼美舒利)的细胞毒性与药物浓度和作用时间成正相关,划痕实验结果表明三种药物均具有抗CAL-27细胞体外迁移的能力,微管模型实验结果同划痕实验且三种药物可进行对比以尼美舒利作用更为显著。结论:利用设计的微流控装置成功构建了CAL-27细胞体外三维培养模型,并筛选出了三种具有抗CAL-27细胞体外迁移作用的非甾体类抗炎药(阿司匹林、吲哚美辛、尼美舒利)。
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