【摘 要】
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胸腺是产生T淋巴细胞的中枢免疫器官,在机体免疫中占有非常重要的地位。胸腺细胞和胸腺上皮细胞(TECs)是构成胸腺实质的两种主要细胞类型。特别是TECs,其构成胸腺细胞发育所
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胸腺是产生T淋巴细胞的中枢免疫器官,在机体免疫中占有非常重要的地位。胸腺细胞和胸腺上皮细胞(TECs)是构成胸腺实质的两种主要细胞类型。特别是TECs,其构成胸腺细胞发育所必须的独特的三维网状胸腺微环境,维持T细胞的分化成熟。研究表明,胸腺随着年龄的增长而逐渐退化与TECs网状微环境的破坏有密切关系。另外,包括雌激素在内的甾体激素是促进胸腺退化的关键因素。TECs是雌激素重要的靶作用位点,因为TECs上富含雌激素受体α(ERα),但关于雌激素作用于TECs的机制还未研究透彻。因此,研究雌激素对TECs的相关作用机制对揭示胸腺退化萎缩具有重要的意义。本文以小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1为研究对象,采用CCK-8、荧光染色、流式细胞术、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等实验方法及转录组测序和iTRAQ定量蛋白组学技术并对数据进行GO、KEGG、String等生物信息学分析,探讨17β-雌二醇对MTEC1细胞增殖活力、细胞周期、细胞凋亡、转录组表达谱及蛋白质表达谱等影响及机制研究,得到如下结果:(1)17β-雌二醇以剂量依赖的方式影响MTEC1细胞,包括改变细胞形态,抑制细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G2/M期,以及导致细胞凋亡。(2)17β-雌二醇可引起MTEC1细胞的mRNA表达谱变化,特别引起细胞周期、细胞凋亡基因发生显著性变化,其可能通过p53信号通路调控细胞增殖抑制与细胞凋亡。(3)17β-雌二醇可导致MTEC1细胞的蛋白质表达谱发生变化,包括GRP78、PDI、Calr等内质网应激相关蛋白在内的61个上调差异表达蛋白和10个下调差异表达蛋白。这些差异表达蛋白主要涉及到细胞增殖、细胞凋亡、免疫反应等细胞生理过程。推测内质网应激通路介导17β-雌二醇诱导MTEC1发生细胞凋亡。结论:17β-雌二醇可引起MTEC1细胞的基因组和蛋白组表达变化,改变细胞内环境稳态,主要通过p53信号通路和内质网应激通路参与调控细胞增殖活力并诱导细胞凋亡。
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