背景与目的肝癌、胃癌都是常见的消化道恶性肿瘤,其发病率在我国有逐年上升趋势。浸润转移则是其致死性的重要机制。肿瘤的浸润转移涉及众多癌基因和抑癌基因之间的平衡失调和相关转移基因的表达异常等,其转移过程包括肿瘤细胞的运动、黏附、新生血管的形成以及对基质的降解等。泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome pathway,UPP)是由泛素( ubiquitin,Ub)以及一系列相关的酶组成,除泛素以外还包括4种酶家族:泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzymes,E2)、泛素-蛋白连接酶(ubiquitin-ligating enzymes,,E3)和蛋白酶体(proteasome),包括20S和26S蛋白酶体,而26S是由20S和19S复合体共同结合装配而成。KAI1基因定位于人染色体11p11.2,是一段全长2.4 kb的DNA片段,早先被证明是前列腺癌转移抑制基因。其编码一个分子量为29,610 kDa的蛋白质—KAI1蛋白,事实上,人们研究发现,KAI1蛋白结构与CD82完全相同。KAI1蛋白是TM4SF成员之一,其具有4个疏水跨膜区和一个较大的胞外亲水区,在胞外亲水区中则含有3个潜在的N端糖基化位点。研究表明KAI1通过影响细胞-细胞、细胞基质之间的相互作用,从而影响肿瘤细胞的转移和浸润。大量研究表明,KAI1蛋白参与细胞与细胞-细胞与细胞-外基质间的反应,并可与肿瘤细胞表面黏附受体的结合,通过封闭黏附受体、阻断肿瘤细胞黏附从而抑制肿瘤细胞的转移并保护机体免于内源性和外源性物质损伤。Gp78也被称为肿瘤自分泌运动因子受体,它是一个跨膜蛋白。其表达水平与肿瘤的转移密切相关。研究表明,gp78是内质网(ER)环指结构为基础的泛素蛋白连接酶(E3)。gp78可特异性地募集MmUBC7,而MmUBC7是一种泛素蛋白连接酶(E2),可通过指环的一个特定区域参与了内质网相关的降解。更为重要的是,gp78也能介导CD3δ的降解,而CD3δ则是ER相关降解最具特征的底物。相反,当gp78缺少紧密的指环和多重的跨膜区域时,CD3δ的稳定性大大提高。因此,gp78被认为是泛素化、ER降解以及肿瘤转移潜在的枢纽。同时,研究发现gp78与恶性肿瘤预后不良有关。在相关性研究中,人们发现,泛素连接酶gp78可靶向作用于KAI1,增加KAI1的降解,从而减少KAI1的表达,增加肉瘤细胞系的转移潜能。事实上,gp78、KAI1在消化道肿瘤中的系统研究还不多见。基于此,本课题拟通过检测gp78、KAI1在肝癌、胃癌组织中表达情况并结合相关临床资料,探讨gp78、KAI1在消化道肿瘤发生、发展过程中意义及相关性。同时,我们采用小鼠肝癌模型,采用免疫组织化学方法检测肝组织中gp78和KAI1的表达水平。通过上述研究我们希望初步探讨gp78、KAI1在消化道肿瘤中可能的作用机制,为其将来运用于临床诊断、预后判断、药物治疗靶点的选择等提供一定的临床和实验依据。方法1.收集人肝癌、胃癌组织标本,采用免疫组化法、Western blot法,检测癌组织中gp78及KAI1表达情况。2.建立小鼠肝癌模型,采用免疫组化法、Western blot法检测裸鼠癌组织中gp78及KAI1表达变化。3.所有计量资料以x±s,采用SPSS 10.0统计软件进行数据分析。两组间比较采用t检验或χ2检验。采用配对样本t检验比较癌与正常组织之间gp78及KAI1表达的差异,Spearman相关性分析检验分析gp78和KAI1之间的相关性,以p<0.05为差异具有统计学意义。结果1.人肝癌、胃癌组织中,gp78蛋白表达明显上调,KAI1表达明显下调。2.裸鼠肝癌组织中gp78蛋白表达明显上调,KAI1蛋白表达明显下调。3.肝癌和胃癌组织中gp78和KAI1表达水平呈现明显的负相关。结论1.胃癌及相应正常胃粘膜组织中,gp78与KAI1表达呈现明显负相关,提示过表达的gp78导致抑癌基因KAI1降解增多可能是胃癌浸润、转移的机制之一。2.在人肝癌组织和裸鼠原位肝癌组织样本中,gp78蛋白表达水平显著升高,而KAI1明显降低;同样,在裸鼠肝癌转移灶中,gp78蛋白表达水平明显升高,而KAI1表达水平明显降低,表明KAI1/gp78可能参与了肝癌的侵袭转移过程。