石杉碱甲(Huperzine A，HupA)是草药蛇足石杉中存在的天然生物碱，是一种强效、可逆性的乙酰胆碱酯酶抑制剂（AChE inhibitor），可以用于治疗阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease，AD）和其他记忆障碍病症，因此成为研究人员关注的热点。与石杉碱甲结构相似的石杉碱乙(Huperzine B，HupB)也具有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性，天然石杉碱甲和石杉碱乙及以其骨架来合成的类似物被大量用于药理、药效和临床研究。然而，石杉碱甲和石杉碱乙在石杉科植物中含量很低，药源植物资源的匮乏已成为发展新型药物的瓶颈。科学利用有限的植物资源非常重要，为此本研究目的是开发一种快速和低成本的HupA和HupB分离纯化工艺，对不同提取和纯化的方法进行比较，建立一套精确的检测和分离方法，并对其中关键的改性剂进行了研究，最后对反相制备色谱分离进行了优化。此外，本研究还进行了对蛇足石杉内生真菌的筛选和初步活性研究。1、确定了高效液相色谱检测HupA和HupB的流动相条件：0.1%TFA，18%甲醇，1mL/min，该方法快速、准确，证实了不同产地蛇足石杉中的含量差异。研究发现添加改性剂可以有效改善HupA和HupB的分离，减少拖尾，酸改性剂对流动相pH的调节作用对保留时间和分离度有很大影响，三氟乙酸(TFA)是最佳的酸改性剂。2、比较了传统浸提、超声提取和闪式提取法提取HupA和HupB的效果，初步纯化用树脂法和萃取法的差别。超声提取得率可达75%，操作简单易放大，更加适合工业生产；较之于其他树脂，弱极性大孔树脂SP850吸附解吸效果最好，可以有效浓缩提取液100倍以上，HupA和HupB回收率都在90%以上。3、优化了制备色谱分离HupA和HupB的进样量和流速，最佳条件：0.1%TFA，流速8mL/min，上样量40mg，同时得到HupA和HupB纯度均在98%以上，总回收率分别为83%和81.8%。4、从安徽黄山、福建三明的蛇足石杉植株中分离出52株内生真菌。用75%乙醇浸泡3min，15%次氯酸钠处理15-18min可以达到最好的消毒效果，分离得到的青霉属内生真菌可能产生抑菌性物质和石杉生物碱类物质。