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目的通过研究重型再生障碍性贫血(Severe Aplastic Anemia,SAA)及免疫相关性全血细胞减少症(immuno-related pancytopenia,IRP)患者CD4~+和CD8~+T淋巴细胞CD19~+B淋巴细胞中转录因Bach2、Blimp-1及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达水平及相关性分析,进一步阐明SAA,IRP患者免疫损伤骨髓造血的具体过程及差异,有利于更全面地了解免疫相关的发病机制,从而为寻找预防、诊断和治疗SAA、IRP的新策略提供理论依据。方法选取2014年8月至2016年3月期间入住天津医科大学总医院血液科的初治SAA、IRP患者,治疗后缓解期复查的SAA、IRP患者及正常对照者为研究对象。第一部分研究SAA患者中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞中转录因子Bach2的表达,采用免疫磁珠方法分选SAA初治及缓解期患者各10例及10名健康正常人外周血CD4~+或CD8~+T淋巴细胞,实时定量PCR检测分选细胞转录因子Bach2的表达水平。同时利用流式细胞学的方法检测CD4~+或CD8~+T淋巴细胞中转录因子Bach2的表达水平及CD8~+T淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B的表达情况,并与转录因子Bach2的表达水平进行相关性分析。第二部分研究IRP患者中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞及CD19~+B淋巴细胞中转录因子Bach2的表达。以免疫磁珠阳性分选IRP初治及缓解期患者各10例及10名正常健康人CD4~+或CD8~+T淋巴细胞,实时定量PCR检测分选细胞转录因子Bach2的表达水平。同时利用流式细胞学的方法检测CD4~+或CD8~+T淋巴细胞及CD19~+B淋巴细胞中转录因子Bach2的表达水平。第三部分研究SAA及IRP患者中CD4~+或CD8~+T淋巴细胞及CD19~+B淋巴细胞中转录因子Bach2的下游靶标转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达。以免疫磁珠阳性分选SAA初治及缓解期患者各10例,IRP初治及缓解期患者各10例及10名正常健康人CD4~+或CD8~+T淋巴细胞,实时定量PCR检测分选细胞转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达水平。同时利用流式细胞学的方法检测CD4~+或CD8~+T淋巴细胞及IRP患者CD19~+B淋巴细胞中转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达水平。并对转录因子Bach2与转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达水平进行相关性分析。结果第一部分(1)初治SAA患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞Bach2 m RNA的表达均显著低于正常对照者(Mann-Whitney U检验,P<0.05)。免疫抑制治疗后,缓解期患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞Bach2 m RNA的表达和初治组相比明显上升(Mann-Whitney U检验,P<0.05)。(2)流式细胞检测初治SAA患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Bach2的中位表达分别为39.04(24.45-54.20)%和40.86(26.20-80.20)%,正常对照者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞Bach2的中位表达分别为53.64(33.28-86.72)%和64.98(47.00-92.70)%。初治SAA患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Bach2的表达均显著低于正常对照组(P<0.05)。免疫抑制治疗后,缓解患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Bach2的表达分别为63.93(40.4-95.56)%和74.05(46.84-91.85)%,和初治组相比均明显升高(P<0.05)。(3)全体观察对象外周血CD8~+T淋巴细胞内穿孔素的表达与其Bach2的表达呈显著负相关(r=-0.684,P<0.05)。外周血CD8~+T淋巴细胞内颗粒酶B的表达与Bach2的表达亦呈显著负相关(r=-0.389,P<0.05)。第二部分(1)IRP初治患者外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞内Bach2的m RNA表达水平较正常对照者无显著差异(Mann-Whitney U检验,P>0.05)。(2)流式细胞检测初治IRP患者外周血CD4~+及CD8~+T细胞内Bach2的中位表达分别为44.53(26.40-64.00)%和59.23(36.19-82.12)%,正常对照者外周血CD4~+及CD8~+T细胞Bach2的中位表达分别为53.64(33.28-86.72)%和64.98(47.00-92.70)%。初治IRP患者外周血CD4~+及CD8~+T细胞内Bach2的表达和正常对照组相比均无显著差异(P﹥0.05)。初治IRP患者外周血CD19~+B淋巴细胞内Bach2的中位表达为86.57(78.33-92.24)%,正常对照者外周血CD19~+B淋巴细胞内Bach2的中位表达为85.14(69.39-92.56)%。初治IRP患者外周血CD19~+B淋巴细胞内Bach2的表达较正常对照组无显著性差异(P>0.05)。(3)SAA初治患者外周血CD8~+T淋巴细胞内Bach2的m RNA以及流式检测的表达水平较IRP初治组均显著降低(P<0.05)。第三部分(1)SAA患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1的m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高(P<0.05),免疫抑制治疗后明显下降(P<0.05)。(2)IRP患者外周血CD19~+B淋巴细胞内Blimp-1流式检测的表达水平较正常对照者显著升高(P<0.05),免疫抑制治疗后明显下降(P<0.05)。IRP患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Blimp-1的QPCR检测m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异(P﹥0.05)。(3) IRP患者外周血CD4~+T淋巴细胞及CD19~+B淋巴细胞内HO-1流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高(P<0.05),免疫抑制治疗后明显下降(P<0.05)。IRP患者外周血CD8~+T淋巴细胞内HO-1的QPCR检测m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异(P﹥0.05)。(4)全体观察对象CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1与Bach2的表达呈显著负相关(P<0.05),IRP患者CD19~+B淋巴细胞内Blimp-1与Bach2呈显著负相关(P<0.05);HO-1与Bach2呈不显著负相关(P>0.05)。结论(1)SAA初治患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Bach2的QPCR检测的m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均显著降低,经免疫抑制治疗后显著上升。(2)IRP患者外周血CD4~+和CD8~+T淋巴细胞及CD19~+B淋巴细胞内Bach2的QPCR检测m RNA表达水平以及流式检测表达水平较正常对照者均无显著差异。SAA初治患者外周血CD8~+T淋巴细胞内Bach2的m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较IRP初治组均显著降低。(3)SAA患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1的QPCR检测的m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高,经免疫抑制治疗后显著下降。(4)IRP患者外周血CD19~+B淋巴细胞内Blimp-1流式检测的表达水平较正常对照者显著升高,免疫抑制治疗后明显下降。IRP患者外周血CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Blimp-1的QPCR检测m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异。IRP患者外周血CD4~+T淋巴细胞及CD19~+B淋巴细胞内HO-1流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高,免疫抑制治疗后明显下降。IRP患者外周血CD8~+T淋巴细胞内HO-1的QPCR检测m RNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异。(5)全体观察对象CD4~+及CD8~+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1与Bach2呈显著负相关,IRP患者CD19~+B淋巴细胞内Blimp-1与Bach2呈显著负相关;HO-1与Bach2呈不显著负相关。