鸭坦布苏病毒（duck Tembusu virus,DTMUV）属于黄病毒科,黄病毒属,自2010年爆发后给我国造成巨大的经济损失,市场上已有的商品化DTMUV灭活疫苗与弱毒疫苗分别存在遗传背景不清楚与免疫原性不佳等缺点。因此,本文旨在利用重新定位RNA病毒在序列空间中的进化方向这种新的减毒策略,通过实验探讨该方法在TMUV减毒疫苗候选株的设计和培育中的可行性。首先,考虑到黄病毒的原核毒性使其在克隆过程中易突变,我们搭建了一个全新的TMUV基因组体外操作技术平台。通过将内含子片段（133bp）插入到DTMUV NS1的192个位点后,使全长c DNA克隆在大肠杆菌中稳定复制,无原核毒性,且无需体外转录。并且,由c DNA克隆衍生的r TMUV-i表现出与p TMUV相似的特性。然后,基于此平台我们对DTMUV的E和NS1蛋白上的69个丝氨酸和53个亮氨酸密码子进行了改造,将分别编码这两个氨基酸的六个密码子统一修改为与终止密码子仅相差一个碱基,获得在序列空间进化方向改变的CQW1-OTS。CQW1-OTS在体外实验中的特性与CQW1-WT相似,且在人为增加突变驱动力的条件下成功减毒,所以该方法在特定情况下是DTMUV的一个新型减毒策略。但是,当我们将CQW1-OTS作为疫苗备选在5日龄的SPF雏鸭中进行相关的疫苗免疫指标检测时,却观察到病毒并未致弱。这让我们意识到该减毒策略可能存在一定的选择压力程度的限制。所以,我们进一步使用25日龄的同源宿主青年鸭和3周龄的异源宿主小鼠进行相关研究。在同源宿主中观察到CQW1-OTS轻度减毒,而在异源宿主中（小鼠）CQW1-OTS减毒明显（脑内病毒滴度、临床症状、特异性感染力）。以上说明同源宿主施加的选择压力不足以驱动该病毒产生足够数量的致死性突变,解释了为什么体外压力下已经减毒的CQW1-OTS对雏鸭致病力却没有变化。本研究证明了利用和改变重新定位RNA病毒在序列空间中的进化方向而致弱病毒的策略适用于TMUV,但同时也证明了基于策略减毒的CQW1-OTS的局限性和条件限制性。