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前言 传统的有创性产前诊断对孕妇的损害是不言而喻的。虽然诊断的准确率较高,但有损伤胎儿或导致孕妇流产、感染的可能。1969年,Walknowska等在孕妇外周血中发现了胎儿核型的细胞(46,XY)。这使得人们可以通过获取孕妇外周血中的胎儿细胞,进行无创性的产前基因诊断。这种方法对孕妇和胎儿无损伤,具有取材方便、风险小,不受孕妇年龄和病史等影响的优点,是目前产前诊断发展的方向。有多种富集和分离胎儿有核红细胞的方法可供选择:如利用有核红细胞物理特性的密度梯度离心法,或利用有核红细胞表面相对特异性抗原的MACS、FACS法,还有利用有核红细胞内的血红蛋白γ链、ε链、ξ链的单克隆抗体免疫标记法。本课题组前期利用胎儿有核红细胞抗血红蛋白γ链抗体标记,获得特异的胎儿细胞,成功地进行了遗传病的产前基因诊断。血红蛋白ε链、ξ链是出现在孕早期的胚胎血红蛋白链,具有更高的特异性。我们尝试应用抗血红蛋白ε链抗体标记胎儿细胞,在孕早期进行诊断,以期获得更准确的结果。选择抗体标记的方法特异性较高,但成本也较高,同时操作较繁琐。所以我们建立了利用胎儿和成人血红蛋白间生化差异的Kleihauer抗酸染色法。这是一种简单、快速、有效的胎儿细胞标记方法,适合于临床推广应用。 标记后的胎儿细胞通过显微操作方法挑取出来后,必须进行全基因组扩增获得完整的胎儿基因组序列,以满足后续基因诊断的需要。现行的PEP法和DOP-PCR法都是基于PCR的全基因组扩增方法,不可避免会产生非特异性的扩增产物,不完全的位点覆盖率甚至位点或等位片段的缺失,这些都会对基因诊断的结果造成严重的影响。最近一种新的全基因扩增技术:多重置换扩增(Multiple Displacement Amplification,MDA),能够提供高度均一完整的全基因组序列,确保最低的位点扩增误差,是一种真正意义的全基因组扩增方法。我们用此方法进行胎儿有核红细胞的全基因组扩增,以探讨其在无创性产前基因诊断中应用的可行性。