SPR生物传感器的构建及对大肠杆菌E.coli O157:H7的快速检测

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随着我国城乡经济的发展与人民生活水平的提高,食品的数量与种类日益丰富,如何提高食品的质量与安全性的问题日益突出。据国内外统计,在各种食物中毒中,以细菌性食物中毒最多。其中大肠杆菌是细菌性食物中毒中最常见的致病菌之一,且对人体危害很大。因此,食品工业急需一种快速简便的分析方法,以对食品中的微生物污染物进行检测。表面等离子共振检测技术,是一种无需标记、无需分离纯化并能在线实时监测生物分子相互作用、可确定反应物种类和浓度的检测技术,由于具有灵敏度高、所需试样少、样品无需标记及检测速度快等特点,被广泛应用于食品、医疗、环境等监测领域。自从Liedberg等将SPR技术用于化学传感器研究领域以来,SPR传感器逐渐成为国际传感器领域的研究热点。为保证检测的准确性,本文将亲和素-生物素系统和银纳米粒子用于表面等离子体共振(SPR)生物传感器,放大检测的信号。使用这些方法,用于检测大肠杆菌E. coliO157:H7,扩展了表面等离子体共振(SPR)生物传感器对大肠杆菌的检测限。主要研究内容包括:1. SPR生物传感器直接检测大肠杆菌E. coli O157:H7。运用分子的自组装技术,对表面等离子体共振(SPR)生物传感器芯片进行修饰。使用MPA作为基底膜,将抗体偶联固定在传感芯片上。利用抗体对于抗原的特异性结合,实现了大肠杆菌与传感器的结合。采用系列浓度大肠杆菌E. coli O157:H7溶液进样法,将不同浓度的菌液流经传感芯片记录响应信号。实验结果表明,表面等离子体共振(SPR)生物传感器对低浓度的大肠杆菌检测的响应信号较弱,检测结果不准确。可以检测到的大肠杆菌E. coliO157:H7的浓度是105cfu·mL-1。2.基于生物素与亲和素间的高度特异性结合力、桥联作用以及放大作用,将生物素-亲和素系统用于表面等离子体共振生物传感器。在芯片表面通过自组装将MPA固定,作为基底膜,在该基底膜上依次组装亲和素、生物素标记的抗体,形成以抗体为表面的生物传感器,该传感器表面可以结合大肠杆菌,并实现对大肠杆菌的检测。实验结果表明,引入亲和素-生物素系统,在传感器表面形成了多层膜结构,放大了检测的响应信号,有利于大肠杆菌的检测。与引入亲和素-生物素系统前相比,响应信号增强,检测限降低。可以检测到的大肠杆菌E. coli O157:H7的浓度是104cfu·mL-1。3.银纳米粒子用于表面等离子体共振生物传感器的检测。首先运用氧化还原法合成银纳米粒子,并将其用AET功能化,通过紫外光谱进行表征。将功能化的银纳米粒子引入到表面等离子体共振(SPR)生物传感器中。结果表明,银纳米粒子的引入增大了芯片的比表面积,从而显著增大了灵敏度,降低了检测限。SPR传感器对大肠杆菌E. coliO157:H7的检测限为103cfu·mL-1
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