【摘 要】
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低温与高盐是限制植物生长和分布的两个重要因素,是近年来研究的热点.在对低温的研究中发现,抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质,能直接影响冰晶形成,对其研究有利于深入了
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低温与高盐是限制植物生长和分布的两个重要因素,是近年来研究的热点.在对低温的研究中发现,抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质,能直接影响冰晶形成,对其研究有利于深入了解生物的抗冻机理.而Na<+>/H<+>逆向转运蛋白是生物膜上普遍存在的转运蛋白,它能够利用质膜H<+>-ATPase、液泡膜H<+>-ATPase和PPiase产生的跨膜H<+>梯度把Na<+>排出细胞或在液泡中区隔化以消除Na<+>的毒害.该研究通过DNA体外重组构建了胡萝卜抗冻蛋白基因和胡杨Na<+>/H<+>逆向转运蛋白基因的原核表达载体pET43.1b-AFP和pET43.1b-PeNHA,并在上述重组质粒AFP基因和PeNHA基因的N端融合了6个组氨酸构成的标签.该论文着重研究了重组质粒在受体细胞E.coli BL<,21>(DE<,3>)中的表达和表达产物的纯化,优化了表达条件.研究结果表明,在IPTG终浓度是1mmol,诱导时间为3小时和4小时,表达量达到最高值,分别表达出100KD和97KD的可溶性融合蛋白,并利用固定化金属镍离子(Ni<+>)配体亲和层析一步纯化出PeNHA融合蛋白.该项研究为后继的蛋白功能鉴定、特性分析和抗体的制备等奠定了基础.
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