【摘 要】
：
目的对比分析食管癌患者与非食管癌患者中的RgpA/B基因,筛选出食管癌患者中的优势菌株进行克隆、表达;同时运用杂交瘤技术制备单克隆抗体,为进一步研制用于临床检测和诊断P.gingivalis感染的试剂盒提供物质基础。方法(1)RgpA/B基因型在食管癌患者和非食管癌患者中的差异:收集74例食管癌患者和135例非食管癌患者口腔牙龈标本,经PCR扩增RgpA/B基因并测序,统计RgpA/B基因在两组人
论文部分内容阅读
目的对比分析食管癌患者与非食管癌患者中的RgpA/B基因,筛选出食管癌患者中的优势菌株进行克隆、表达;同时运用杂交瘤技术制备单克隆抗体,为进一步研制用于临床检测和诊断P.gingivalis感染的试剂盒提供物质基础。方法(1)RgpA/B基因型在食管癌患者和非食管癌患者中的差异:收集74例食管癌患者和135例非食管癌患者口腔牙龈标本,经PCR扩增RgpA/B基因并测序,统计RgpA/B基因在两组人群中的检出率;利用Clustal X软件进行同源性分析,观察RgpA/B基因的聚集分布,寻找出食管癌患者的优势菌株。(2)食管癌患者优势菌株中RgpA/B基因的克隆与表达:利用食管癌患者的优势菌株,构建了原核表达质粒p ET-28a/RgpA、p ET-28a/Rgp B,转化至BL21大肠杆菌中,构建原核表达菌株BL21/p ET-28a/RgpA-P046、BL21/pET-28a/RgpB-P046。经IPTG诱导表达获得重组目的蛋白,并通过HisTrip HP镍柱亲和层析对其纯化。(3)RgpA/B蛋白单克隆抗体的制备及应用:以上述基因工程目的蛋白作为抗原免疫小鼠,制备单克隆抗体并鉴定其特性,制备ELISA试剂与PCR法进行比较以确定其临床性能。结果(1)RgpA/B基因型在食管癌患者和非食管癌患者中的差异:经PCR扩增,RgpA基因在食管癌患者和非食管癌患者中阳性率分别为71.62%和43.70%;Rgp B基因在两组中的阳性率分别为72.97%和42.96%。食管癌患者中RgpA/B基因检出率明显高于非食管癌患者(P<0.01),差异有统计学意义;经同源性分析,食管癌患者RgpA/B基因在多个区域有明显的聚集簇,将其定义为食管癌患者的优势菌株。(2)食管癌患者优势菌株中RgpA/B基因的克隆与表达:本实验成功构建了原核表达质粒(p ET-28a/RgpA、p ET-28a/Rgp B)和原核表达菌株(BL21/pET-28a/RgpA-P046、BL21/pET-28a/RgpB-P046)。将原核表达菌株在含卡那霉素的培养基中培养,用IPTG进行诱导,培养至24h时,目的蛋白表达量最高,分子量大小与预测结果一致;经His Trip HP镍柱层析纯化,PAGE电泳鉴定纯度>90%。(3)RgpA/B蛋白单克隆抗体的制备及应用:成功制备了抗RgpA-P046蛋白的杂交瘤细胞株,收获纯化其单克隆抗体。经检测,小鼠腹水抗体效价为1:10~6;抗RgpA-P046单抗亚型为Ig G1型,此单抗特异性较好,与其他抗原无交叉反应;将制备的单抗通过ELISA法检测食管癌患者P.gingivalis的RgpA抗原,与PCR法扩增标本的RgpA基因相比较,两种方法结果差异无统计学意义(P=0.46)。结论本实验成功找到食管癌优势P.gingivalis的优势菌株,克隆其RgpA/B基因并表达纯化RgpA/B抗原,以此为免疫原,成功制备抗RgpA-P046单抗,初步鉴定效果良好,为研制P.gingivalis快速诊断的金标试纸条或ELISA试剂盒提供物质基础。
其他文献
自从2014年在政府工作报告中首次提出鼓励非国有资本进入金融、能源、公用事业等领域以来,PPP项目经历了一个快速发展时期,但是在PPP项目不断发展过程中,因政府介入权的行使导致项目失败的案例也越来越多。各地开始清退不合规的项目,旨在提高项目落地率。尤其是根据PPP项目合同延伸出来的政府“监管者”与“合作者”双重角色问题、合同的“权力因素”与“契约因素”问题,引发了广泛的讨论。其中,关于政府介入权的
视频目标跟踪在许多计算机视觉应用中扮演着关键的角色,包括视频监控、人机交互和行为识别等。一个成功的跟踪系统的两个关键点就是如何有效建模目标外观以及如何准确的从所
以抖音为代表的短视频兴起之后,社会上对其评价褒贬不一。为了弄清大学生群体对抖音等短视频的认知偏好和使用情况,本文采用问卷调查的方式,以南京大学生为对象,展开了一次调查研究。在调查与分析之前,对认知和使用的相关理论进行了梳理和总结,以此为基础得出研究路径,并对相应的研究对象进行分析,为调查研究做好准备工作。根据调查得到的数据,采用SPSS数据分析软件进行科学处理和分析,发现南京大学生对于抖音这类短视
近年来,随着工农业和环保等领域的快速发展,化学传感器在环境的保护和监控、疾病的预防和控制等领域应用广泛。化学传感器可通过化学反应对某种分析物产生响应,从而达到对分
纪检监察机关是党内纪律部队,是党和人民维护国家政权、捍卫民族复兴的利剑。习近平总书记在中央纪委五次全会上提出,努力建设一支政治素质高、忠诚干净担当、专业化能力强、
目的:观察温针灸治疗中风后尿潴留的临床疗效,为温针灸治疗中风后尿潴留提供临床依据,为临床治疗提供优选方案。方法:将从广东省第二中医院针灸康复科住院部收集的60例符合条件的中风后尿潴留的患者按照随机对照,采用随机方法分为试验组(温针灸)和对照组(电针组)各30例。两组均根据中风病诊疗规范予以一般基础药物治疗、中风病基本体针治疗、留置尿管、中风病康复训练。两组患者每天治疗1次,1周6天,休息1天,为1
面对日益严重的环境污染和能源短缺等问题,寻找绿色的可再生能源来替代化石燃料是面临的迫切任务。氢气作为推动未来世界经济发展的重要能源载体,具有很高的能量密度,且无碳排放。电催化水分解作为一种可持续的产氢技术,对未来氢经济的发展至关重要。然而,电解水是一种能量上坡的化学过程,其缓慢的反应动力学严重影响了析氧(OER)和析氢(HER)两个半反应的效率。目前,贵金属(如Pt/C、Ir O_2、Ru O_2
超级电容器是集多重优势于一身的新储能装置,具体表现为:成本投入较低、安全性高、使用周期长等,因此在诸多领域实现了规模化普及与应用。然而,目前超级电容器的电极主要以碳材料过渡金属氧化物材料为主,其理论比电容低、稳定性差,无法满足新能源存储需求。因此,开发存储能量高、循环稳定性好的活性电极材料成为了研究者们争相探讨的课题。二硫化钼(MoS_2)是一种高性能过渡金属硫化物,有独特的物理化学性质,其含有基
随着物联网、电子商务和社会化网络在全世界范围内的快速普及,全世界数据的储量呈爆发式地增长,世界正在向数字化世界转变。数据挖掘就是研究如何有效地将这些看似毫无关系的海量数据中隐含的、新颖的、能被人们理解并且加以利用的知识提取出来的一门综合学科。聚类作为构成数据挖掘的重要部分,它是将没有附加任何簇标签的数据集分割成几个子集,使得每个子集内分配的数据对象更加相像,其中任何子集间分配的数据对象之间区别更大
语言测试的反拨效应指语言测试对语言教和学产生的影响。HSK三级考试是吉国汉语学习者高度关注的外语测试。本文研究的目的是通过调查HSK三级考试对吉国学生产生的实际反拨效应,寻找方法有效利用积极反拨效应以求进一步促进吉国当地孔院的汉语教学。本文借鉴国内外反拨效应研究成果,以吉尔吉斯斯坦2018年至2019年之间参加HSK三级考试的106名汉语学习者为研究对象,运用问卷调查和访谈的研究方法收集实证数据。