负载褪黑素的电纺纤维膜促进肩袖腱骨愈合的实验研究

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目的:体外评估负载褪黑素的聚己内酯电纺纤维膜(Melatonin-PCL电纺膜)对于人骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)向软骨细胞分化的影响。体内探究Melatonin-PCL电纺膜对于大鼠急性肩袖损伤修复的作用。方法:通过乳液电纺技术纺制定向Melatonin-PCL电纺膜,扫描电镜观察电纺纤维膜形态,接触角仪测量水接触角,多功能酶标仪测定Melatonin-PCL电纺膜中褪黑素缓释情况,Cell Counting Kit-8(CCK-8)评估电纺支架的生物相容性。使用含有电纺膜浸提液的软骨诱导培养基培养软骨小球,对软骨小球进行组织学和免疫组织化学检测。利用Glycosaminoglycans Assay Kit测定软骨小球内糖胺多糖含量。实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测软骨相关基因表达量。建立大鼠急性肩袖损伤修复模型,修复时置入Melatonin-PCL电纺膜。从组织学,免疫组织化学,生物力学三方面评估修复效果。结果:负载Melatonin-PCL电纺膜具有定向排列的结构,能够缓释褪黑素接近20天,且对于hBMSCs的生长没有影响。相对于Control组和单纯PCL电纺膜组,Melatonin-PCL电纺膜能够更有效地促进软骨小球生长,增加Ⅱ型胶原和糖胺多糖的分泌。同时其能够增强软骨相关基因collagen type Ⅱ,aggrecan和sox-9的表达。术后2周和4周,相对于Control组和单纯PCL电纺膜组,Melatonin-PCL电纺膜组巨噬细胞浸润的数量最少。术后4周和8周,番红固绿染色以及Ⅱ型胶原免疫组化结果显示Melatonin-PCL电纺膜能够促进腱骨止点区域软骨形成。天狼猩红染色显示Melatonin-PCL电纺膜能够更好地促进冈上肌腱的修复。生物力学结果显示Melatonin-PCL电纺膜组冈上肌肌腱-肱骨复合体的极限负荷,极限应力以及刚度明显优于Control组和单纯PCL电纺膜组。结论:Melatonin-PCL电纺膜生物安全性好,同时具有良好的定向结构。Melatonin-PCL电纺膜可以增强hBMSCs向软骨细胞分化。Melatonin-PCL电纺膜能够促进大鼠急性肩袖损伤后腱骨止点的重建,促进腱骨愈合。
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