霉菌的氧化压力抗性机制研究

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霉菌是一种重要的医学以及工业微生物,作为病原菌,其氧化压力抗性可以使它成功感染人体;作为工业微生物,其体内的氧化压力又会影响产量。因此如果能够了解它的氧化压力抗性机制,便可以为开发新型的霉菌类药物提供理论指导,也能为工业发酵氧化压力的失衡引起的产量问题提供解决方案。然而目前对于霉菌氧化压力抗性机制的研究还十分缺乏。因此本文对霉菌的氧化抗性机制进行了研究,基本结果可归纳为以下几点:1.发现了An8692是霉菌抗氧化的关键基因。通过对霉菌6个Prx基因的敲除,发现敲除了 An8692的菌株对过氧化氢极度敏感,而回复突变株又恢复了其氧化耐受性,因此得出该基因为关键基因,并且发现该基因所编码的蛋白的细胞定位为细胞质。2.酶学性质分析得出霉菌的Prx是一类特殊的Prx。首先活性位点突变确定该Prx属于一类CPCR反向的典型2-半胱氨酸的Prx,其与底物结合的方式是一个协同作用的方式。此外还发现该酶对过氧化氢是极端耐受的,而对叔丁基过氧化氢却是很敏感的。3.阐明了霉菌Prx极端耐受过氧化氢的机理。通过与酵母的Ahp1进行耐受性比对发现,霉菌Prx体系对过氧化氢的极端耐受性还需要归功于霉菌的TrxR。因此打破了普遍认为的Prx的耐受性决定整个Prx体系的耐受性的观点。4.建立了一种检测过氧化氢的新方法。由于Prx与过氧化氢反应过程中消耗NADPH,通过检测NADPH的消耗量,我们建立了一种能够简单,快速,精确,且抗干扰能力强的检测过氧化氢的方法。
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