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百合（Lilium brownii var.Viridulum）是百合科（Liliaceae）百合属（Lillium）的多年生草本植物,原产于我国,有着悠久的历史,是高蛋白低脂的保健食品,有抗氧化、润燥清热、养阴润肺作用,具有很强的食用价值、药用价值、观赏价值,优质的百合抗病品种意义重大。病程相关基因非表达子是基础抗性以及抗病基因决定抗性的重要调控因子,对系统获得抗性和诱导系统抗性发挥着关键调控作用,NPR1与TGA2转录因子能相互识别作用,增强SAR信号通路基因的表达,促进下游PR基因的表达。本研究将对百合中的NPR1基因和TGA2转录因子功能进行初步探索,主要实验结果如下:1.LhSorNPR1和LhSorTGA2基因的克隆及分子特性以“索邦”百合叶片的cDNA为模板,根据NCBI转录组数据库,通过PCR技术扩增出具有完整ORF框的百合两个基因—LhSorNPR1、LhSorTGA2的cDNA全长序列。LhSorNPR1基因cDNA含有一个1854bp编码617个氨基酸的开放阅读框,编码蛋白的预测分子量约为68k D,构建其系统进化发育树,并将其编码的蛋白与其他NPR蛋白进行同源比对,发现其与水稻、二柄短尾草、唐菖蒲的亲缘关系较近。LhSorTGA2基因cDNA含有一个1278bp编码425个氨基酸的开放阅读框,编码蛋白的预测分子量约为48k D,构建其系统进化发育树,并将其编码的蛋白与其他TGA蛋白进行同源比对,发现其与水稻、唐菖蒲、油棕的亲缘关系较近。此外,通过转录激活实验发现LhSorTGA2为转录激活子。2.LhSorNPR1基因和LhSorTGA2基因在百合中的组织表达量分析采用实时荧光定量PCR技术,对LhSorNPR1、LhSorTGA2基因在百合不同组织、不同处理（JA、SA、椭圆葡萄孢、尖孢镰刀菌）的表达特性进行分析。结果表明两基因在百合不同组织均有表达,但在两基因都是在花丝中表达量最高,在花瓣中表达量都最低;JA处理后,LhSorNPR1和LhSorTGA2基因的表达量大致上均呈上升趋势,但时间段表达量有所差异;SA处理后,都是在最开始的1 h表达量最高,1 h后表达量明显降低。在椭圆葡萄孢处理后,LhSorNPR1基因表达量大致上升趋势,而LhSorTGA2基因只在24 h时有显著上升水平,尖孢镰刀菌处理后,发现LhSorNPR1基因都是在处理24 h后达到峰值,而LhSorTGA2基因在处理36 h后达到峰值。推测LhSorNPR1基因、LhSorTGA2基因都可能在植物的生物/非生物胁迫中起作用,参与SA、JA信号转导途径。3.LhSorNPR1和LhSorTGA2基因原核表达初探构建原核表达载体pET32a（+）-LhSorNPR1和pET32a（+）-LhSorTGA2,并转化到宿主大肠杆菌Trans B（DE3）Chemically中,对两者分别进行初步表达分析,经SDS-PAGE电泳检测获得翻译出的蛋白分子量与预期值一致,p ET32a（+）-LhSorTGA2约为68k D,p ET32a（+）-LhSorNPR1约为88k D。再将融合蛋白进行诱导剂浓度、温度以及时间等条件的优化表达,发现在0.1m M IPTG、28℃诱导6 h条件下,两者表达出的融合蛋白浓度最高。后续对两者的融合蛋白进行可溶性分析,发现两者的融合蛋白均属于包涵体蛋白。4.LhSorNPR1和LhSorTGA2基因转烟草的抗病功能研究构建植物超表达载体pCAMBIA2301-LhSorNPR1、pCAMBIA2301-LhSorTGA2,利用叶盘转化法转化烟草。选择其中表达量稍高,中,低的三个株系进行接种病菌处理。实验结果表明,转入百合LhSorNPR1、LhSorTGA2基因的烟草对尖孢镰刀菌有更强的抗性,病斑不明显或较野生型、空载型叶片的病斑面积少。病原菌处理后的生理指标显示,转基因LhSorNPR1基因、LhSorTGA2基因的抗性强于野生型和空载型,初步判定LhSorNPR1、LhSorTGA2与植物抗病性相关。5.LhSorNPR1-TGA2串联表达载体构建用Overlap技术将两基因连接在一起,并构建了植物超表达载体p CAMBIA2301g-LhSorNPR1-TGA2,采用叶盘转化法转入烟草,为后续串联基因的功能分析奠定了基础。