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目的探讨Micro RNA-150通过中性粒细胞对小鼠细菌感染发病的影响。方法利用两组小鼠,一组去除Micro RNA-150基因的小鼠(Micro RNA-150knock-out,Mi R-150KO)及另外一组正常野生型WT-C57BL/6J小鼠(Wild typeC57BL/6J,WT-C57BL/6J)进行如下实验:1提取mi R-150敲除小鼠和野生型WTC57BL/6J小鼠鼠尾基因组采取PCR扩增技术检测基因型;2 mi R-150基因敲除做real-time-PCR鉴定;3 mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠血常规和流式细胞测定中性粒细胞;4制备细菌感染模型:选择(6-10周)匹配的雄性mi R-150敲除和WT-C57BL/6J小鼠,分组为150KO对照组、150KO实验组、WTC57BL/6J对照组、WT-C57BL/6J实验组。实验组经过尾静脉分别给予大肠杆菌生理盐水溶液100μL,同时对照组100μL无菌生理盐水尾静脉注射;每隔4小时观察记录一次,总共观察24h,记录小鼠一般表现,mi R-150基因敲除小鼠和WTC57BL/6J小鼠感染后24h存活率对比;5感染后mi R-150基因敲除小鼠和野生型WT-C57BL/6J小鼠骨髓和外周血PMN流式细胞分析;6感染后mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠血培养菌落计数;7感染后mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠外周血PMN瑞氏染色;8 mi R-150基因敲除小鼠和WTC57BL/6J小鼠外周血PMN体外吞噬试验;9感染后mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠肺脏组织切片和HE染色。结果1.mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠鼠尾基因组DNA经过PCR扩增,分别产生了262bp和866bp长度片段,明确基因型无误。2.mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠胸腺和脾脏细胞进行real-time-PCR,mi R-150基因敲除小鼠对于mi R-150基因的表达明显低于WT-C57BL/6J小鼠。3.常规血球计数和流式结果显示:mi R-150基因敲除小鼠外周血白细胞、中性粒细胞和中性粒细胞百分比都显著高于WT-C57BL/6J小鼠,骨髓做流式细胞分析发现两组小鼠中性粒细胞没有明显差异。4.感染存活实验结果为对照组mi R-150基因敲除小鼠和WTC57BL/6J小鼠全部存活,存活率为100%;实验组mi R-150基因敲除小鼠存活率为(73.3±3.3)%,实验组WT-C57BL/6J小鼠存活率为(46.7±2.5)%,存活率前者显著高于后者。5.感染后外周血和骨髓流式细胞术分析结果:实验组mi R-150基因敲除小鼠外周血PMN显著高于WT-C57BL/6J小鼠,而骨髓中性粒细胞明显低于WT-C57BL/6J小鼠,两种小鼠骨髓中性粒细胞均较各自对照组明显下降。6.载菌血培养实验:对照组两种小鼠血培养平板均无菌落生成,实验组小鼠外周菌血培养12h生成明显白色湿润,边缘整齐,圆形有特殊气味菌落;WT-C57BL/6J小鼠菌血培养形成的菌落数目(4.20±0.18)×103/20μL外周血,mi R-150基因敲除小鼠计数菌落(0.48±0.01)×103/20μL外周血,mi R-150基因敲除小鼠单位体积外周血活菌含量明显较WT-C57BL/6J小鼠少。7.瑞氏染色结果显示:对照组mi R-150基因敲除小鼠比WT-C57BL/6J小鼠外周血PMN数量多,形态无明显差别,多为3～5分叶核中性粒细胞;实验组mi R-150基因敲除小鼠比WT-C57BL/6J小鼠外周血PMN数量多,前者多为分叶核中性粒细胞,并且出现PMN的破碎颗粒,后者PMN中杆状核比例增高。8.PMN体外吞噬实验结果显示:mi R-150KO小鼠PMN吞噬百分率(95.0±5.8)%,WT-C57BL/6J小鼠PMN吞噬百分率(87.0±3.6)%,mi R-150KO小鼠中性粒细胞吞噬能力高于WT-C57BL/6J小鼠。9.肺脏组织切片HE染色:对照组肺脏组织切片可见肺脏无水肿,无出血,肺泡壁结构完整,形态正常,肺泡腔清晰,无明显的渗出物,肺泡和间质无炎性细胞浸润。实验组Mi R-150KO小鼠肺泡体积增大,肺泡间隔有所增宽,肺泡腔内出现炎性细胞,但完整性尚未遭到破坏。实验组WT-C57BL/6J小鼠肺泡腔明显大小不等,肺泡间隔增宽,肺泡壁变薄,完整性部分遭破坏,肺泡周围浸润了较多炎症细胞。结论1.mi R-150的缺失导致小鼠中性粒细胞数量明显增高。2.mi R-150的缺失可以可以降低细菌感染后血液中活菌数目,提高小鼠存活率。3.mi R-150的缺失可以减轻细菌感染造成的肺脏损伤。4.mi R-150的缺失可以增强小鼠细菌感染发病致死的抵抗能力。图13幅;表7个;参142篇。