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海洋尖尾藻是一种分布较广、有重要生态学意义的异养型甲藻。目前,对海洋尖尾藻的研究主要集中在摄食、游动行为、地理分布、遗传多样性及细胞学和形态学特征等方面,但在自然海域中的丰度研究非常匮乏。为此,本文建立了一种快速定量海洋尖尾藻丰度的分子生物学方法,检测了自然海域中海洋尖尾藻的丰度。此外,通过研究视紫红质在海洋尖尾藻中的多样性及不同类型视紫红质的功能,探讨了在食物缺乏时海洋尖尾藻及其他甲藻对光能的利用机制。主要结论如下: 1.建立了快速定量海洋尖尾藻丰度的分子生物学方法首先对比了不同的DNA提取方法,发现硅珠破碎法可以有效提高DNA回收率。不同生长期海洋尖尾藻18S rDNA的拷贝数不同,稳定期为2033±22copies·cell-1,而指数期的拷贝数明显高于稳定期(3585±58 copies·cell-1)。建立了基于18S rDNA的实时定量PCR方法,该方法特异性和灵敏度都很高,检测限度为:0.1 cell·mL-1,该方法为以后大批量样品定量分析提供了基础。 2.检测了长岛湾海域中海洋尖尾藻的丰度长岛湾自然海域中海洋尖尾藻的丰度较低(100~2.7×103cells·L-1)。鲁格氏液固定会导致海洋尖尾藻的DNA回收率降低,进而低估了其在自然海域中的丰度。为更如实的反应海洋尖尾藻的丰度,在浮游植物样品采集时,尽量避免用固定液固定样品,而应立即收集细胞,将其放入DNA裂解液中保存。 3.研究了视紫红质在海洋尖尾藻光能利用中的功能首次证明在饥饿条件下,海洋尖尾藻中的质子泵型视紫红质可以起到提高海洋尖尾藻存活率的作用。基于转录组得到的视紫红质序列,设计了特异性引物,通过RACE技术获得了四种趋光性感受器型视紫红质全长cDNAs。系统发育树分析表明海洋尖尾藻中至少有两种类型的视紫红质:质子泵型与趋光性感受器型,前者在转录组数据中占的比例比较高。逆转录实时定量PCR结果表明住光照条件下,在食物缺乏的情况下,海洋尖尾藻的存活率与视紫红质基因的表达量远比在黑暗条件下高,并且质子泵型的视紫红质表达量远高于趋光性感受器的表达量。