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目的:建立准确、灵敏的人血浆中倍他米松(BOH)及17-丙酸倍他米松(B17P)的高效液相串联质谱(LC-MS/MS)测定方法,研究健康男性志愿者单剂量肌肉注射复方倍他米松注射液(含二丙酸倍他米松5mg和倍他米松磷酸钠2mg)后活性代谢物BOH和B17P的血药浓度经时过程,估算相应的药代动力学参数,评价复方倍他米松注射液受试制剂与参比制剂的生物等效性,为新药报批及其临床应用提供试验依据。方法:建立和验证LC-MS/MS测定人血浆中BOH和B17P浓度的方法。血浆中加入内标二丙酸倍氯米松(IS),经乙醚:环己烷混合液(体积比4:1)提取后,利用LC-MS/MS法测定血浆中BOH和B17P的浓度。色谱柱为Agilent Zorbax C18 (2.1 mm×150 mm,3.5μm),水/甲醇(15:85)为流动相,流速为0.20ml·min-1,质谱以选择反应监测模式(MRM)进行数据采集,BOH采用负离子(ESI-)检测,B17P和IS采用正离子(ESI+)检测。BOH、B17P和IS选择的离子对分别是361→307,471→397和543→433。考察中国健康男性志愿者单剂量肌肉注射复方倍他米松注射液受试制剂和参比制剂后BOH、B17P的药动学参数,并对两种制剂的生物等效性进行评价。将22名中国健康男性志愿者随机编号分为两组,采血点设计为:给药前(0h)和给药后0.25,0.5,1,2,3,4,6,8,12,24,36,48,72,120,192,264,360h分别采集前臂静脉血,每次采集4ml,置事先冰水浴保存的肝素化试管(预先加入2 mol·L-1的酯酶抑制剂二甲基砷酸钠)中,倒置混匀(40s内),4℃4000rpm离心5min,分离上层血浆加入50%(w/v)氟化钾溶液,置于-65℃冰箱保存以备分析。血浆样品的测定运用上面建立的LC-MS/MS法。运用BAPP3.0软件计算受试制剂和参比制剂主要药代动力学参数Cmax、Tmax和AUC,进行生物等效性判断。结果:1. BOH和B17P的标准曲线线性范围分别为0.1～30 ng·ml-1和0.05～2 ng·ml-1;高、中、低三种浓度的批间和批内精密度均小于15.0%;提取回收率在65%左右;相对回收率(准确度)均在85～120%之间;BOH和B17P的稳定性良好;2. BOH受试制剂(T)和参比制剂(R)的药动学参数分别为:Tmax分别为(1.8±1.2)h和(1.5±1.0)h,Cmax分别为(15.06±3.91)ng·ml-1和(15.56±4.27)ng·ml-1,T1/2分别为(14.65±3.65)h和(15.08±4.11)h,AUC0-t分别为(203.87±50.04)ng·h·ml-1和(200.73±47.08)ng·h·ml-1,AUC0-∞分别为(208.96±50.07)ng·h·ml-1和(206.61±48.57)ng·h·ml-1;3. B17P受试制剂(T)和参比制剂(R)的药动学参数分别为:Tmax分别为(23.4±13.0) h和(18.0±11.7)h,Cmax分别为(0.77±0.25)ng·ml-1和(0.74±0.19)ng·ml-1,T1/2分别为(88.67±17.78)h和(78.63±18.69)h,AUC0-t分别为(67.38±15.17)ng·h·ml-1和(65.84±14.99)ng·h·ml-1,AUC0-∞分别为(76.23±16.92)ng·h·ml-1和(72.79±15.69)ng·h·ml-1;4.对两种制剂的BOH和B17P的参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞进行方差分析、双单侧t检验和[1-2α]置信区间法检验,结果表明上述参数生物等效。Tmax经非参数法检验(Wilcoxon符号秩检验)差异没有显著性意义(P>0.05),这表明复方倍他米松注射液受试制剂和参比制剂生物等效。结论:本研究建立的LC-MS/MS分析方法是一种简单、灵敏、快速且准确的质谱方法。适用于测定BOH和B17P在人血浆中的药物浓度。根据上述试验结果,可判定复方倍他米松注射液两制剂生物等效。