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目的探讨肾癌中Pokemon蛋白的表达及其与临床病理特征的关系;构建Pokemon shRNA重组质粒,观察携带shRNA的重组质粒对肾癌细胞OS-RC-2增殖及凋亡的影响。方法1.采用免疫组织化学SP法检测64例肾癌、10例癌旁组织、20例肾良性肿瘤Pokemon蛋白的表达,并对其与临床病理特征的关系进行分析;2.构建针对Pokemon原癌基因的shRNA重组质粒并对其鉴定;3.采用脂质体LipofactamineTM2000介导转染OS-RC-2细胞,观察转染效率和细胞形态的变化;应用实时荧光定量PCR从1mRNA水平检测shRNA重组质粒对Pokemon基因的抑制情况;4.MTT法分析Pokemon重组质粒转染OS-RC-2细胞的增殖变化;5.流式细胞术分析Pokemon重组质粒转染OS-RC-2细胞的凋亡变化。结果1.Pokemon蛋白表达于肾癌细胞核和细胞质。肾癌细胞Pokemon蛋白高表达率为71.9%,显著高于癌旁组织30%、肾良性肿瘤35%,具有统计学意义(P<0.05);2.肾细胞癌组织中pokemon蛋白的表达与肿瘤组织分级有关,而与患者的性别、年龄、临床分期、病理学类型及淋巴结转移无明显相关性;3.DNA序列分析表明Pokemon shRNA重组质粒构建成功;4Pokemon shRNA重组质粒转染OS-RC-2细胞24h后,在荧光显微镜下即可见转染成功的细胞呈绿色荧光,转染效率大约为42%,细胞形态发生了改变,与对照组的细胞在形态上具有显著差异;实时荧光定量PCR分析表明:Pokemon shRNA重组质粒对细胞中Pokemon基因表达有明显的抑制作用,转染后48h的抑制率65.8%;5.MTT法结果显示Pokemon shRNA重组质粒组能够显著抑制(?) OS-RC-2细胞的增殖;6.流式细胞仪检测细胞结果显示转染Pokemon shRNA重组质粒后,诱导OS-RC-2细胞凋亡,早期凋亡率为40.25±1.48%。结论原癌基因Pokemon高表达可能在肾癌发生中起重要作用且与肾细胞癌的恶性程度有关,构建成功的Pokemon shRNA重组质粒对OS-RC-2细胞中Pokemon mRNA表达具有显著抑制效果,它对OS-RC-2细胞具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。这些结果有助于以后研究Pokemon基因致癌机制,也可能为肾癌治疗提供新的途径。