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背景:结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,M.tb)导致的结核病(Tuberculosis,TB)和丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染引起的丙型肝炎存在共感染现象,但其分子机制不明。我们最近发现M.tbH37Rv的RD13区中编码的Rv2645蛋白能显著刺激Interferon(IFN)-γ的表达水平增高。干扰素刺激基因 15(Interferon-stimulated gene 15,ISG15)是 IFN-α/β 诱导所产生的一种泛素样蛋白质的基因,它参与机体抗感染免疫反应。本文将研究Rv2645基因对免疫细胞中ISG15表达的影响,进而探讨ISG15的表达与丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染之间的相关性。N6-甲基腺苷(m6A)作为目前已知的真核生物mRNA甲基化修饰中最普遍存在的一种修饰方式,已成为现阶段表观遗传学研究的热点。mRNA的m6A参与调控细胞的多种生理活动,在配子形成、胚胎发育及代谢中发挥重要作用。目的:研究ISG15在结核分枝杆菌感染与HCV感染中的作用,并进一步探讨HCV感染中m6A的改变及ISG15对肝细胞内总RNA m6A的影响,为M.tb与HCV共感染的分子机制提供参考依据,同时为研究抗病毒-结核治疗手段和相关治疗策略的研发提供有效参考依据。方法:利用携带Rv2645基因的减毒牛结核分枝杆菌卡介苗(Bacille calmette guerin,BCG)(即rBCG)与未携带Rv2645基因的BCG分别感染小鼠或刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过RT-qPCR及Western Blot方法检测小鼠脾脏CD4+T细胞及RAW264.7细胞中ISG15的mRNA及蛋白的水平。构建ISG15真核表达质粒和ISG15-shRNA,检测ISG15过表达及基因沉默后,对HCV感染的人肝癌细胞系Huh7.5.1中HCVmRNA、NS3及Core蛋白表达的影响。同时,质谱及m6A半定量检测HCV感染后Huh7.5.1细胞中RNA的m6A水平,并通过RT-qPCR及Western Blot方法检测HCV感染及ISG15对m6A相关酶的水平的影响。结果:研究发现,携带Rv2645的BCG感染后小鼠脾脏CD4+T细胞及RAW264.7细胞中ISG15的mRNA及蛋白水平明显升高,而ISG15过表达导致Huh7.5.1中HCV的mRNA、NS3蛋白及Core蛋白的水平明显升高,ISG15沉默后ISG15和HCV的mRNA的水平明显降低。进一步研究发现,HCV感染后Huh7.5.1细胞中RNA甲基转移酶表达上调,去甲基化酶表达下调。当ISG15的高表达甲基转移酶的表达水平上升,而ISG15表达受到抑制时,甲基转移酶的水平也下降,这结果与m6A半定量检测及m6A质谱检测的结果相一致。结论:M.tb Rv2645能上调小鼠免疫细胞中ISG15的表达,而ISG15能促进Huh7.5.1中HCV增殖。另外,HCV感染及ISG15过表达能够促进RNA的m6A修饰。本研究对阐明 M.tb毒性菌株H37Rv的Rv2645基因的功能及M.tb与HCV共感染的分子机制提供参考依据。为研究HCV感染导致慢性病变(如肝硬化、肝癌)的分子机制及抗HCV-抗结核药物的研发提供了新的思路和研究方向。